揚子毛茛活性部位提取工藝及藥效學研究.pdf

1、目的:1.探索揚子毛茛(YangZiMaoGen，YZMG)抗炎活性部位的最佳提取工藝。2.觀察YZMG最佳提取工藝所得提取物對疼痛和炎癥模型的鎮(zhèn)痛和抗炎作用。
　　方法:1.采用正交設計，以乙醇濃度、溶劑體積、提取時間為考察因素，以尿囊素的含量為評價指標優(yōu)選最佳提取工藝。采用二甲苯致小鼠耳腫脹實驗來驗證不同提取物對小鼠的抗炎作用與尿囊素含量的相關性。分別采用蘇木精-伊紅(HE)染色法在電鏡下觀察炎癥細胞的浸潤程度、紫外分光光度法

2、、酶聯免疫吸附法(ELISA)探索YZMG不同提取物對炎癥小鼠血液中前列腺素E2(PGE2)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量的影響以驗證最佳提取工藝。2.應用非特異性炎癥模型腹腔毛細管通透性實驗以及經典的疼痛模型熱板法和醋酸所致扭體實驗來觀察YZMG的抗炎鎮(zhèn)痛活性。
　　結果:1.通過正交實驗優(yōu)選的最佳提取工藝為90％的乙醇以12倍(V/m)體積回流提取1.5 h。通過藥效學驗證發(fā)現，正交實驗所得最佳

3、提取工藝組能降低小鼠耳腫脹度，與模型組比較，差異非常顯著，其對耳腫脹的抑制率最大。含量較低的Ⅲ號、Ⅵ號、Ⅶ號、Ⅷ號提取方案組可降低小鼠耳腫脹度，與模型組比較，差異顯著，抑制率比最佳提取工藝組低。而含量最低的Ⅰ號、Ⅳ號、Ⅴ號、Ⅸ號提取方案組與模型動物空白對照組比較，差異無顯著性。根據正交試驗結果，對尿囊素的含量與耳腫脹抑制率做相關性分析，相關系數為0.816，P＜0.001，差別有統(tǒng)計學意義，尿囊素含量與耳腫脹抑制率之間存在直線相關關系。

4、通過在鏡下觀察藥物對模型動物耳片病變的影響，發(fā)現YZMG最佳提取工藝組對小鼠耳片組織的炎性細胞浸潤程度的抑制作用最強，此組動物炎癥組織中炎癥細胞的數量最少。Ⅲ號、Ⅵ號、Ⅶ號、Ⅷ號提取方案組，對小鼠耳片組織的炎性細胞浸潤程度的抑制作用比最佳提取工藝組小。通過各組對炎癥細胞因子PGE2、IL-6、TNF-α的影響發(fā)現，最佳提取工藝組對3種細胞因子生成的抑制作用最強。2.最佳提取工藝所得提取物的高(10 g·kg-1)、中(5 g·kg-1)

5、、低（2.5g·kg-1）劑量組均可明顯拮抗由熱刺激和醋酸誘導（量效關系明顯）的疼痛反應。高、中劑量組對冰醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性有抑制作用，與模型組比較，差異具有顯著性。低劑量組與模型組比較，差異無顯著性。
　　結論:通過對各種提取物抗炎活性的驗證，得出此最佳提取工藝方案可行，抗炎活性較強;最佳提取工藝所得提取物具有較強的抗炎鎮(zhèn)痛活性，其抗炎作用機制可能與減少PGE2、 IL-6及TNF-α的生成有關，且尿囊素為YZMG抗