附桂骨痛復(fù)方提取工藝及其初步藥效學(xué)研究.pdf

1、附桂骨痛復(fù)方（FGD）取《金匱要略》烏頭湯之精華組方，由附子（制）、川烏（制）、肉桂、黨參、當(dāng)歸、白芍（炒）、淫羊藿、乳香（制）8味中藥組成。溫陽散寒、益氣活血、消腫止痛之功效，對(duì)于陽虛寒濕型頸椎及膝關(guān)節(jié)增生性關(guān)節(jié)炎具有良好的治療作用，臨床試驗(yàn)有效率達(dá)95%，是治療此類疾病的理想藥物。但是目前附桂骨痛復(fù)方仍是采用傳統(tǒng)水煎提法，有效含量低，一次服用的劑量大，質(zhì)量檢測(cè)控制有唯成分論之嫌。為克服以上缺點(diǎn)，尋找一條適合工業(yè)化生產(chǎn)，并達(dá)到減毒增效

2、目的的工藝路線，主要研究內(nèi)容如下： ⑴有效成分分析方法的確定。根據(jù)二帖類生物堿和酸性染料溴甲酚綠在酸性緩沖液中形成的絡(luò)合物能被氯仿提取，并且提取液在412．5 nm處具有吸收值的原理，用分光光度法測(cè)定烏頭總生物堿的含量。酸性染料比色法方法準(zhǔn)確，可作為附桂骨痛復(fù)方的定量測(cè)定方法。利用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方中芍藥苷含量。采用乙腈-0．1%磷酸溶液（14：86）為流動(dòng)相，附桂骨痛復(fù)方提取液經(jīng)過簡單處理，就使其中的芍藥苷色譜峰與其他雜質(zhì)

3、峰能夠較好的分離，無干擾。該檢測(cè)方法供試液的處理過程相對(duì)簡單，提高了檢測(cè)的效率。 ⑵對(duì)附桂骨痛復(fù)方的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。本文研究了三種提取方法：黃酒提取法、半仿生提取法以及微生物發(fā)酵提取法。以烏頭類總生物堿，芍藥苷以及干浸膏得率為考察指標(biāo)，通過正交設(shè)計(jì)優(yōu)選出黃酒提取法，半生提取法的最佳參數(shù)分別為：溶劑黃酒的濃度為85%，總煎煮時(shí)間為4h，藥材不用粉碎（飲片）；3煎用水的pH值分別為即2．0、7．0、8．5，總煎煮時(shí)間為3小時(shí)。根據(jù)

4、綜合指標(biāo)的評(píng)價(jià)γ值，將以上兩種方法與微生物發(fā)酵提取法進(jìn)行比較研究，發(fā)現(xiàn)后者γ值最大。該法所得烏頭總生物堿含量大于半仿生提取法的2倍。而且微生物發(fā)酵提取液比較澄清，可能正是因?yàn)榇藢?duì)有效成分有濃縮作用，從而大大提高了中藥活性成分的含量。 ⑶附桂骨痛復(fù)方發(fā)酵前后藥效學(xué)研究。急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果為發(fā)酵后附桂骨痛復(fù)方灌胃給藥的LD50為133．70g·kg-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于發(fā)酵的附桂骨痛復(fù)方灌胃給藥的LD50為118．16g·kg-1。表明發(fā)酵后