慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠前列腺平滑肌細(xì)胞電壓依賴鈣離子通道的定量表達(dá).pdf

1、目的：建立慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠模型，測量炎癥組與正常組大鼠前列腺平滑肌細(xì)胞電壓依賴鈣離子通道的亞型及定量表達(dá)的差異性，探討其在其在慢性前列腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法：皮下注射雌二醇（模型組0.25mg/kg對照組皮下注射無菌生理鹽水），每日一次，連續(xù)注射30天，誘導(dǎo)大鼠非細(xì)菌性前列腺炎，無菌條件下取大鼠前列腺組織，部分組織經(jīng)HE染色行組織學(xué)鑒定，其余組織采用貼塊法體外培養(yǎng)PSMCs，并用差速貼壁法純化，SP法免疫細(xì)胞

2、化學(xué)鑒定，用Trizol裂解純化的細(xì)胞提取總RNA，經(jīng)RT逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，采用雙標(biāo)準(zhǔn)曲線SYBR Green I實時定量PCR法以cDNA為模板測定各亞型鈣離子通道α1亞基與GAPDH的相對表達(dá)水平比值，采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件包分析數(shù)據(jù)，比較兩組間的差異。
　　 結(jié)果：培養(yǎng)細(xì)胞光鏡下多呈梭形或多邊形，內(nèi)有1-2個細(xì)胞核，核大清晰居中，可向細(xì)胞密度低的方向伸出一至數(shù)個足突，細(xì)胞匯合后部分區(qū)域細(xì)胞束狀排列，呈典型“谷峰”

3、狀，符合平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)特征，SP法免疫細(xì)胞化學(xué)染色示α-SMA (+)，證實為PSMCs，炎癥組前列腺組織在光鏡下均發(fā)現(xiàn)間質(zhì)充血水腫，同時腺管管腔內(nèi)和周圍均見大量淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤，前列腺血管內(nèi)聚集大量紅細(xì)胞，具有典型炎癥病理特征，對照組無明顯炎癥表現(xiàn)。熒光定量PCR測定兩組均見L、T、P/Q型鈣通道表達(dá)，炎癥組L型鈣通道(Cav1.2)相對對照組表達(dá)量增多，分別為0.048±0.024，0.031±0.015(t=2.846 P=0

4、.007)，差異具有顯著性，T、P/Q型兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)論：PSMCs細(xì)胞L型鈣通道表達(dá)量增多，通道數(shù)量上調(diào)，Ca2+內(nèi)流增多，造成前列腺部、盆底、膀胱出口平滑肌的張力增加，調(diào)節(jié)功能異常，可以引起尿液返流繼而誘發(fā)化學(xué)性前列腺炎，此外L型鈣離子通道參與慢性疼痛的維持，其表達(dá)量增強(qiáng)會造成痛覺過敏，L型鈣通道可能與CP/CPPS存在一定關(guān)聯(lián)，PSMCs L型VDCC表達(dá)量增加參與了CP的發(fā)病機(jī)制，可能從多種方面影響CP的