醫(yī)用生物蛋白膠及其主體成分纖維蛋白原的免疫原性研究.pdf

1、目的： 研究醫(yī)用生物蛋白膠(FS)及其主體成分纖維蛋白原的潛在免疫原性，旨在為臨床應(yīng)用提供參考，為哺乳動(dòng)物來源的生物蛋白膠進(jìn)一步開發(fā)優(yōu)化奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 采用SDS-PAGE電泳、Westernblot實(shí)驗(yàn)技術(shù)分離確定主體膠成分中的纖維蛋白原蛋白，建立間接ELISA法檢測(cè)纖維蛋白原抗體的檢測(cè)條件。新西蘭白兔創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)及BALB/c小鼠實(shí)驗(yàn)考察醫(yī)用生物蛋白膠及其主體成分纖維蛋白原的免疫原性。新西蘭白兔創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)：

2、使用天繡醫(yī)用生物蛋白膠封閉創(chuàng)傷切口，定期采血檢測(cè)兔血清中纖維蛋白原多克隆抗體水平，Westernblot技術(shù)鑒定血清抗體成分。在成功實(shí)現(xiàn)一次創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)后，在此基礎(chǔ)上實(shí)施二次創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)。BALB/c小鼠實(shí)驗(yàn)：(1)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTT比色法)：分別考察了腹腔注射生物蛋白膠混合液、多次注射生物蛋白膠主體成分以及不同劑量注射生物蛋白膠主體成分對(duì)淋巴細(xì)胞增殖能力的影響；(2)抗體檢測(cè)：檢測(cè)小鼠血清中的抗生物蛋白膠主體成分的抗體水平；(3)NBT

3、試驗(yàn)：檢測(cè)小鼠腹腔注射生物蛋白膠后中性粒細(xì)胞吞噬能力有無增強(qiáng)。 結(jié)果： 1.在有效分離鑒定膠主體成分纖維蛋白原的前提下，確立檢測(cè)纖維蛋白原抗體的間接ELISA檢測(cè)條件：最佳蛋白包被濃度0.5μg/mL。 2.成功建立了兔創(chuàng)傷模型。以間接ELISA方法檢測(cè)兔使用生物蛋白膠后血清抗體水平，發(fā)現(xiàn)在FS封閉后2周封閉組血清抗體水平明顯升高，6周后下降，呈先升高后下降的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)，呈現(xiàn)“一過性”，進(jìn)一步以Westernb

4、lot方法鑒定血清中的抗體成分，證實(shí)NC膜上在對(duì)應(yīng)于凝膠蛋白條帶位置約300kDa處出現(xiàn)的棕褐色陽性雜交印記為纖維蛋白原抗體，初步表明血清中主要的抗體成分為纖維蛋白原抗體。二次使用FS后，抗體變化規(guī)律大致與第一次使用生物蛋白膠變化相同，但高抗體水平持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。 3.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖能力不因注射成分的變化、注射量的變化、注射次數(shù)的變化而變化。 4.在小鼠通過腹腔注射途徑進(jìn)行免疫后，實(shí)驗(yàn)組血清抗體水

5、平與對(duì)照組無明顯差異(P＞0.05)。 5.在小鼠中心粒細(xì)胞-NBT試驗(yàn)中沒有發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)中有藍(lán)紫或藍(lán)黑顆粒沉著的陽性細(xì)胞。 結(jié)論： 1.在兔創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用生物蛋白膠后，兔血清出現(xiàn)抗膠主體成分纖維蛋白原蛋白的抗體，持續(xù)一段時(shí)間，抗體水平變化規(guī)律呈一過性升高趨勢(shì)，重復(fù)使用生物蛋白膠后，可出現(xiàn)同樣的變化規(guī)律，提示天繡醫(yī)用生物蛋白膠在兔可以引發(fā)抗體的產(chǎn)生，表現(xiàn)出一定的免疫原性。 2.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示生物蛋