用于蠐螬防治的Bt土壤顆粒劑篩選.pdf

1、蠐螬已成為世界性的重要的地下害蟲，它不僅為害花生、大豆等經(jīng)濟作物，還會對一些糧食作物（如小麥、玉米等）造成損失。據(jù)統(tǒng)計，蠐螬在我國的常年危害面積已超過一億畝次。針對蠐螬的防治，目前農(nóng)業(yè)上主要依賴化學(xué)農(nóng)藥，但是化學(xué)農(nóng)藥的大量應(yīng)用也帶來了一系列的問題，主要是其所造成的藥劑殘留容易引起人畜中毒;因此使用安全、有效、殺蟲特異性強的生物殺蟲劑——蘇云金芽胞桿菌（簡稱Bt）對蠐螬進行防治具有巨大的前景和優(yōu)勢。Bt在生長過程中所產(chǎn)生的營養(yǎng)期殺蟲蛋白（

2、Vip蛋白）和殺蟲晶體蛋白（Cry蛋白）對昆蟲具有特異的殺蟲活性，對人畜安全無害，所以在生物防治中得到廣泛的應(yīng)用?，F(xiàn)有的商業(yè)化的Bt殺蟲制劑主要針對鱗翅目(Lepidoptera)和雙翅目(Diptera)等害蟲，并且在害蟲控制方面的應(yīng)用也取得了巨大的成功;但是目前國內(nèi)對鞘翅目(Coleoptera)地下害蟲蠐螬高效的Bt殺蟲制劑的商品化產(chǎn)品尚處于空白階段，而為了能更好地提高Bt殺蟲劑防治蠐螬的效果，降低其價格，本文針對一種新型的用于防

3、治蠐螬的Bt顆粒劑開展了一系列的研究，主要包括以下幾個方面:
　　本研究首先構(gòu)建了Bt185-gfp菌株，將能夠表達綠色熒光蛋白的gfp基因與pSTK表達載體連接，利用Pery3Aa7啟動子使Bt185在營養(yǎng)期就可以表達綠色熒光蛋白，便于Bt185-gfp菌株的菌落統(tǒng)計。
　　同時，對適宜Bt增殖的培養(yǎng)基進行了篩選，在選取得幾種營養(yǎng)豐富的物質(zhì)中，Bt菌株在花生粕培養(yǎng)基上的生長效果最佳。此外，通過鏡檢觀察及SDS-PAGE分析

4、在花生粕培養(yǎng)基上Bt185菌株和HD73菌株的晶體蛋白形成情況，發(fā)現(xiàn)這兩種Bt菌株都能夠在花生粕培養(yǎng)基上形成完整的晶體（Bt185菌株形成球形晶體，HD73菌株形成菱形晶體），且在能夠清晰表達130 kDa的殺蟲蛋白條帶，說明花生粕培養(yǎng)基并未影響B(tài)t伴胞晶體蛋白的產(chǎn)生和釋放。
　　進一步定量地測定了Bt在花生粕培養(yǎng)基中的增殖情況，液體發(fā)酵培養(yǎng)的結(jié)果發(fā)現(xiàn):在花生粕培養(yǎng)基0.5％和1％濃度情況下其單位質(zhì)量花生粕所獲得的Bt活菌數(shù)量為1

5、816.67×108cfu/g，與實驗室常用的LB培養(yǎng)基相比，在P＜0.05水平上無顯著性差異。隨后，將花生粕加入Bt菌粉后壓制成顆粒劑后分別測定了在無菌條件下及在土壤環(huán)境中Bt在顆粒劑中的活菌數(shù)量變化情況，結(jié)果顯示在這兩種環(huán)境中Bt在顆粒劑中活菌數(shù)量均顯著增加:在無菌條件下，顆粒劑中Bt活菌數(shù)量最高增加30倍左右，可達10.35×107 cfu/粒;將其包埋在土壤中時，顆粒劑內(nèi)Bt活菌數(shù)量最多為3.90×107 cfu/粒，增加了40

6、倍左右。
　　隨后，在實驗室環(huán)境下利用壓制的顆粒劑對蠐螬進行了生物活性測定，以花生粕加入Bt185菌粉壓制的顆粒為實驗組，以微晶纖維素壓制的顆粒為對照組，在初始Bt185含菌量相同的情況下，死亡率由未加入花生粕的19％提高到加入后的61％，大大提高了其殺蟲活性。
　　此外，本研究針對花生粕中存在的大量可培養(yǎng)細(xì)菌這一問題，引入了膨化處理這一加工技術(shù)，操作過程簡便快捷，能夠去除花生粕中大部分細(xì)菌，且可培養(yǎng)細(xì)菌去除率達到86.32

7、％，并且經(jīng)膨化處理后在花生粕濃度為1％情況下與高溫高壓滅菌的花生粕相比，對Bt的增殖能力相當(dāng)，因此，膨化處理是花生粕處理的一個很好的途徑。與此同時，幾株對土傳病害有防治作用的生防菌株在膨化處理額花生粕上生長情況結(jié)果顯示，花生粕不僅能夠為Bt生長提供營養(yǎng)物質(zhì)，而且能夠有利于綠僵菌、枯草芽胞桿菌、解淀粉芽胞桿菌、萎縮芽胞桿菌以及木霉生長。
　　本文圍繞用于蠐螬防治的Bt顆粒劑進行了研究，篩選出花生粕這個適合Bt在土壤中生長的營養(yǎng)物質(zhì)，