卡托普利抑制大鼠脈絡(luò)膜新生血管的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討應(yīng)用氬綠激光誘導(dǎo)建立Long-Evants大鼠脈絡(luò)膜新生血管(CNV)動物模型的可行性，觀察MMP-2和VEGF在大鼠視網(wǎng)膜上的表達(dá)情況，探討卡托普利對脈絡(luò)膜新生血管(CNV)的影響及其作用機(jī)制。 方法：選取健康成年Long-Evants大鼠，用氬綠激光光凝大鼠視網(wǎng)膜誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)膜新生血管動物模型。于光凝后3天，5天，7天，14天，21天，28天行眼底FFA+眼底拼圖照相后用4％多聚甲醛全身灌流固定，取出眼球制作標(biāo)本

2、切片，將部分切片進(jìn)行蘇木素/伊紅(HE)染色光鏡下觀察脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)變化，觀察CNV形成情況，判定該動物模型是否成功可靠；部分切片進(jìn)行免疫熒光及免疫組化實(shí)驗(yàn)使用，以觀察MMP-2及VEGF的表達(dá)規(guī)律。造模成功后，將第二批健康成年大鼠隨機(jī)分為空白組(A組)和實(shí)驗(yàn)組，后者又分為脈絡(luò)膜新生血管對照組(B組)，卡托普利灌喂組(C組)，生理鹽水灌喂組(D組)。實(shí)驗(yàn)組大鼠于光凝后3天，5天，7天，14天，21天，28天行眼底FFA+眼底拼圖照

3、相后用4％多聚甲醛全身灌流固定，取出眼球制作標(biāo)本切片。將各組切片進(jìn)行蘇木素/伊紅(HE)染色光鏡下觀察脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)變化，免疫熒光方法檢測RPE層MMP-2表達(dá)的變化，免疫組織化學(xué)方法檢測視網(wǎng)膜組織中VEGF表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1．造模結(jié)果： 1.1 眼底FFA+拼圖照相觀察：光凝后3天光凝斑部位視網(wǎng)膜水腫，表現(xiàn)為熒光著色，光凝后7天，光凝斑處開始出現(xiàn)熒光素滲漏，提示CNV出現(xiàn)，第21天達(dá)到高峰。

4、 1.2 髓染色光鏡下觀察：大鼠光凝后3天脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜出現(xiàn)水腫，細(xì)胞排列紊亂等變化。光凝后7天，可見大量成纖維細(xì)胞和少量CNV形成，隨著病程延長病變加重。CNV形成21天達(dá)高峰。 2．MMP-2及VEGF的表達(dá)規(guī)律： 2.1 免疫熒光檢測MMP-2：于光凝后3天在光凝處的RPE層檢測到MMP-2熒光著色的陽性表達(dá)，光凝后5天其表達(dá)達(dá)高峰然后逐漸減少。MMP-2在未被激光損傷的視網(wǎng)膜組織不表達(dá)或有很弱表達(dá)。 2.2

5、 免疫組織化學(xué)檢測VEGF：于光凝后14天，VEGF蛋白在視網(wǎng)膜上有較明顯的陽性表達(dá)，隨著病程延長其表達(dá)增強(qiáng)，于第21天達(dá)高峰。VEGF在未被激光損傷的視網(wǎng)膜組織只有很弱表達(dá)。 3．卡托普利干預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 3.1 眼底FFA+拼圖照相觀察：卡托普利灌喂組(C組)大鼠在各時間點(diǎn)出現(xiàn)熒光素滲漏的光斑數(shù)較脈絡(luò)膜新生血管對照組(B組)有明顯減少，即CNV形成明顯減少。 3.2 HE染色光鏡下觀察：卡托普利灌喂組(C組)大

6、鼠在各時間點(diǎn)的脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜組織病變程度較脈絡(luò)膜新生血管對照組(B組)有明顯減輕。 3.3 免疫熒光檢測MMP-2：卡托普利灌喂組(C組)大鼠在相應(yīng)的各時間點(diǎn)RPE層中MMP-2的熒光強(qiáng)度明顯降低，表示其表達(dá)較脈絡(luò)膜新生血管對照組(B組)有顯著減弱(p<0.05)。 3.4 免疫組織化學(xué)檢測VEGF：卡托普利灌喂組(C組)大鼠在相應(yīng)的各時間點(diǎn)視網(wǎng)膜中VEGF的表達(dá)較脈絡(luò)膜新生血管對照組(B組)有明顯減弱(p<0.05)。

7、 結(jié)論： 1．氬激光損傷可以成功誘導(dǎo)Long-Evants大鼠形成CNV動物模型，成模時間短，成模率高。 2．在CNV模型大鼠視網(wǎng)膜上mmp-2和VEGF的陽性表達(dá)較正常大鼠有明顯增強(qiáng)。 3．根據(jù)mmp-2和VEGF的表達(dá)規(guī)律，提示基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)在新生血管形成的早期起著關(guān)鍵性的作用，其表達(dá)可能對后來VEGF的表達(dá)起上調(diào)作用，兩者之間的相關(guān)性有待進(jìn)一步研究。 4．卡托普利能夠抑制實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)