具有H274Y突變的2009大流行H1N1協(xié)同耐藥突變株生物學(xué)特性研究.pdf

1、第一部分神經(jīng)氨酸酶表面展示方法的建立
　　 目的：建立有效的甲流病毒神經(jīng)氨酸酶表面展示方法。
　　 方法：利用真核表達(dá)、活病毒感染、酵母展示系統(tǒng)獲得表面展示的NA，用熒光發(fā)光法檢測神經(jīng)氨酸酶(NA)酶學(xué)特性，采用流式細(xì)胞儀檢測其與候選抗體3種抗體的親和力。
　　 結(jié)果：真核表達(dá)、酵母展示系統(tǒng)均可以使神經(jīng)氨酸酶在表面展示，且具有與活病毒NA相似的特性。在候選的3種抗體中，真核表達(dá)以及病毒的NA可1、3號(hào)抗體結(jié)合，病

2、毒的NA還能與3號(hào)抗體結(jié)合;而酵母展示系統(tǒng)的NA與3種抗體均不能結(jié)合。
　　 結(jié)論：活病毒感染系統(tǒng)適合用于NA表面展示，抗體1和3均可用于檢測NA表面表達(dá)。
　　 第二部分具有H274Y突變的2009大流行H1N1協(xié)同耐藥突變株生物學(xué)特性初步研究
　　 目的：研究具有H274Y突變2009大流行H1N1協(xié)同耐藥突變株病毒繁殖能力、NA酶學(xué)特性。
　　 方法：采用反向遺傳學(xué)和定點(diǎn)突變獲得A/Californ

3、ia/04/2009(CA04)野生型以及7個(gè)突變毒株(H274Y，I222R，I222T，I222K，I222R+H274Y,I222K+H274Y，I222T+H274Y)。用熒光發(fā)光法檢測NA性能，流式細(xì)胞儀檢測NA表面展示，通過生長曲線測定了解病毒的繁殖能力。
　　 結(jié)果：與野生型相比，I222T單突變對(duì)奧司他韋的敏感性下降，但并不影響病毒的生長以及NA表面展示和酶活。I222K/R突變對(duì)兩種神經(jīng)氨酸酶抑制劑敏感性下降，