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文檔簡介
1、阿膠為馬科動物驢Equus asinus L.的干燥皮或鮮皮經煎煮、濃縮制成的固體膠,在臨床上主要用于補血和改善微循環(huán)。阿膠傳統(tǒng)的鑒別方法經驗依賴性強,準確度較低。核磁共振法(NMR)是將核磁共振現(xiàn)象應用于測定分子結構的一種譜學技術,獲得的圖譜信息非常豐富,因此基本上代表了中藥重要的整體化學組成,可以客觀、全面地反映中藥所含成分的特征。將NMR用于阿膠真?zhèn)舞b別的研究尚未見報道。因此,本課題采用NMR方法對中藥阿膠水提液成分進行測定,結合
2、化學計量學方法對核磁共振圖譜進行模式識別,初步建立了阿膠真?zhèn)舞b別的核磁共振方法。
近年來關于中藥指紋圖譜與藥效的關系研究(即譜效關系)已有一些進展,然而這些研究工作中大都采用HPLC指紋圖譜的色譜峰面積直接和藥效指標進行關聯(lián)。藥效活性與成分的含量密不可分,而峰面積的大小不能完全代表對應成分實際含量的大小,因而基于色譜峰面積與基于成分實際含量建立的譜效關系是否等價值得進一步探討。本課題針對上述存在問題,采用黃芪藥材標準品作為
3、研究對象,研究在何種條件下,以指紋圖譜峰面積代替成分實際含量進行譜效關系研究是等價的;在此基礎上首先選用黃芪藥材作為研究對象,以清除自由基活性為藥效指標,對黃芪藥材譜效關系進行研究,挖掘與抗氧化活性顯著相關的特征峰,并為重要特征峰進行定性分析;其次進一步研究了黃芪多糖、黃芪黃酮類成分以及黃芪其它成分提取物HPLC指紋圖譜與抗疲勞作用之間的譜效關系,為黃芪藥材的質量控制和評價提供了參考依據(jù)。
本論文工作的研究內容主要分為以下
4、幾個方面:
1、測定了東阿阿膠、福膠、古井阿膠和偽品阿膠水溶性成分的1H-NMR圖譜,通過把1H-NMR圖譜分成不同的局部間隔區(qū)域,在優(yōu)化后的局部間隔區(qū)域上進行PLS分析,準確地鑒別了阿膠真品和偽品;對該圖譜區(qū)域所反映的物質成分信息進行了分析,結合參考文獻,推測阿膠真品和偽品的物質成分差異可能來自丙氨酸,亮氨酸,賴氨酸,精氨酸,谷氨酸和脯氨酸。
2、以5種黃芪藥材標準品作為研究對象,進行5因素、4水平的正交實
5、驗設計,獲得各次實驗組合HPLC指紋圖譜和清除DPPH自由基活性。分別以指紋圖譜峰面積和成分實際含量對藥效指標進行多元線性回歸分析,并嘗試從理論上探討在何種條件下,以指紋圖譜峰面積代替成分實際含量進行譜效關系研究是等價的。結果表明:只要峰面積和對應成分實際含量的線性關系良好,可以采用色譜峰面積代替成分的實際含量進行譜效關系研究。
3、對不同產地黃芪和其提取條件采用正交實驗設計,分別測定各次實驗的HPLC指紋圖譜和清除DPP
6、H自由基的能力,采用偏最小二乘回歸(PLSR)對黃芪藥材指紋圖譜與抗氧化活性相互關系進行研究。結果表明:黃芪中多數(shù)化學成分具有清除DPPH自由基的能力;采用HPLC-DAD-MS聯(lián)用技術對部分色譜峰進行定性分析,根據(jù)色譜峰的質譜圖和紫外光譜確定了7個色譜峰表征的可能成分,分別為毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、芒柄花苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷、2′-羥基-3′,4′-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖
7、苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素和3-羥基-9,10-二甲氧基紫檀烷。
4、采用適當提取方法,獲得黃芪多糖、黃芪黃酮類成分以及黃芪其他類成分提取物,以三類提取物為考察對象,選用U*11(114)均勻設計表安排實驗,進行了抗疲勞作用實驗(小鼠負重游泳實驗),并測定均勻設計表中各實驗組合的黃芪黃酮類成分、黃芪其他類成分的HPLC指紋圖譜及黃芪總多糖含量,采用正交信號校正-偏最小二乘法(OSC-PLS)分析了黃芪提取物HPLC圖譜與抗疲
8、勞作用之間的譜效關系,結果表明:黃芪中黃酮類與其他類成分的色譜峰對抗疲勞呈增強作用,而黃芪多糖呈減弱作用。通過色譜峰的質譜圖和紫外光譜,結合文獻,確定了9個色譜峰可能的對應成分,分別為芳香膜菊素-7-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷-6″-O-丙二酸酯、毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、芒柄花苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷、2′-羥基-3′,4′-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄
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