間充質干細胞及SDF-1-CXCR4在哮喘大鼠氣道炎癥及氣道重塑中的作用.pdf

1、目的:(1)通過比較慢性哮喘大鼠和正常大鼠的外周血中間充質干細胞含量的差異，初步判斷間充質干細胞與哮喘致病過程之間是否可能存在聯(lián)系。(2)通過觀察哮喘大鼠肺組織、氣道壁SDF-1、CXCR4表達的變化，研究SDF-1、CXCR4是否參與哮喘大鼠氣道炎癥和氣道重塑過程。通過以上實驗研究，為后期靜脈注射移植間充質干細胞，研究其在慢性哮喘氣道炎癥及氣道重塑中的作用及SDF-1/CXCR4信號軸對其的影響打下實驗基礎。
　　方法:(1)將

2、18只SPF級SD雌性大鼠隨機分為:正常對照組、哮喘4周組和哮喘8周組，每組6只。卵清蛋白(OVA)致敏后，霧化吸入OVA制作哮喘模型。哮喘模型成功后，測定氣道壓力;通過HE染色、Image-ProPlus圖像分析軟件分析大鼠支氣管壁的嗜酸性粒細胞(ESO)浸潤情況、測定支氣管管腔的內周長、管壁面積、支氣管平滑肌面積、平滑肌細胞核數(shù);采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，通過流式細胞儀檢測各組間充質干細胞的含量，并分析其與哮喘氣道炎癥

3、及氣道重塑的關系;(2)逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)、蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測各組大鼠肺組織SDF-1、CXCR4的表達變化;用免疫組織化學染色法(IHC)檢測各組大鼠氣道壁SDF-1表達的變化;統(tǒng)計數(shù)據(jù)并分析SDF-1、CXCR4與哮喘氣道重塑及氣道炎癥的關系。
　　結果:(1)哮喘4周組、哮喘8周組大鼠的氣道反應性、氣道壁EOS計數(shù)、支氣管管壁面積、支氣管平滑肌面積、平滑肌細胞核數(shù)目、外周血中間充

4、質干細胞比例均較正常對照組顯著增加(P＜0.01或P＜0.05);哮喘兩組間上述指標差異顯著(P＜0.01);Pearson線性相關顯示:各組大鼠外周血單個核細胞中間充質干細胞的含量與氣道反應性、EOS浸潤數(shù)、支氣管壁面積、支氣管平滑肌厚度及支氣管平滑肌細胞核數(shù)均呈正相關（均P＜0.001）。(2)RT-PCR檢測結果顯示哮喘4周組、哮喘8周組大鼠肺組織SDF-1、CXCR4的表達與正常對照組相比均顯著增強，哮喘8周組的SDF-1及CX

5、CR4的表達較哮喘4周組亦明顯增強，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）;Western blotting檢測結果同RT-PCR結果基本一致;免疫組織化學染色結果顯示哮喘4周組、哮喘8周組大鼠氣道壁SDF-1的表達較正常對照組顯著增加，哮喘8周組的SDF-1的表達量亦高于哮喘4周組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）;Pearson線性相關顯示:各組大鼠肺組織、氣道壁SDF-1、CXCR4mRNA及蛋白的表達與氣道反應性、EOS浸潤數(shù)