環(huán)境高風(fēng)險區(qū)環(huán)境樣品污染物去甲基化表觀遺傳毒性研究.pdf

1、目的:對化學(xué)物去甲基化表觀遺傳毒性QDMP評價方法進行性能測試,應(yīng)用此方法定量評價某環(huán)境高風(fēng)險區(qū)環(huán)境樣品的去甲化表觀遺傳毒性,并探索影響環(huán)境樣品表觀遺傳毒性大小的主要成分。
　　方法:將pEGFP-C3質(zhì)粒人工甲基化處理,處理后的C3質(zhì)粒熒光蛋白基因啟動子區(qū)處于高甲基化狀態(tài),隨后將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進人類HepG-2肝癌細胞株,以需檢測污染物為受試物與改造后的細胞株(EGFP-HepG2)共培養(yǎng),依據(jù)細胞綠色熒光強度來定量檢測和評價污染物

2、的去甲基化表觀遺傳毒性的強弱(簡稱QDMP方法),對QDMP方法的靈敏性和穩(wěn)定性進行測試,并依據(jù)此方法,選取某環(huán)境高風(fēng)險區(qū)的地表水、地下水、土壤和底泥樣品為代表性的環(huán)境樣品,應(yīng)用QDMP方法檢測和評價其去甲基化表觀遺傳毒性,并對環(huán)境樣品污染物提取液的主要成分進行掃描檢測分析。
　　結(jié)果:QDMP方法性能測試結(jié)果顯示,該方法的評價靈敏度為0.00004μM;對濃度范圍介于0.00016,0.0008,0.004,0.02,0.1μM

3、之間的5-Aza-CdR樣品進行測試,發(fā)現(xiàn)同一樣品5個平行樣品之間的熒光檢測變異程度介于7.5~23.9％之間,顯示出該方法具有一定的穩(wěn)定性。環(huán)境樣品檢測結(jié)果顯示,在9個測試樣(2個地表水、3個地下水、2個土壤、2個底泥)中,有7個樣品去甲基化能力較強,占總個測試樣品的78%,其去甲基化表觀遺傳毒性介于0.065-0.257μM的5-AZA-CdR當(dāng)量之間。一個底泥樣品提取液毒性最高,毒性當(dāng)量為0.257μM;重金屬檢測發(fā)現(xiàn)其中的Cd的

4、濃度為1.62mg/Kg,超過土壤中的標(biāo)準(zhǔn)限值1.00mg/Kg;一個地下水樣品的毒性較高,毒性當(dāng)量為0.142μM;重金屬檢測發(fā)現(xiàn)其中的Mn的濃度為4868.87ug/L,超過土壤中的標(biāo)準(zhǔn)限值300ug/L。四個土壤或底泥樣品中,三個樣品的去甲基化能力較強,重金屬檢測發(fā)現(xiàn)四個樣品的重金屬均超標(biāo),環(huán)境樣品表觀遺傳毒性檢測結(jié)果與環(huán)境分析結(jié)果具有基本一致的趨勢。
　　結(jié)論:QDMP方法具有良好的靈敏性和穩(wěn)定性;部分環(huán)境樣品的去甲基化表