強直性脊柱炎部分血清生物標志物的實驗研究.pdf

1、第一部分：SELDI—TOF—MS技術(shù)篩選強直性脊柱炎患者血清特異性蛋白質(zhì)的研究 目的： 應(yīng)用表面增強激光解析離子化/飛行時間質(zhì)譜(SELDI—TOF—MS)和蛋白質(zhì)芯片技術(shù)檢測強直性脊柱炎(AS)患者血清蛋白質(zhì)指紋圖譜，篩選血清特異性生物標志物，用于AS的早期診斷，預測疾病進展及判斷病情活動。 方法： 1．采用SELDI—TOF—MS技術(shù)和弱陽離子交換(WCX-2)芯片檢測69例初次就診的AS患者、12

2、例健康對照者血清蛋白質(zhì)指紋圖譜，采用SELDI質(zhì)譜儀自帶的BiomarkerWizard軟件初步篩選AS患者血清中特異性表達的蛋白質(zhì)，進一步采用SELDI質(zhì)譜儀自帶BiomarkerPattern軟件(采用決策樹方法對目標對象進行分類)對數(shù)據(jù)進行分析，初步建立AS早期診斷預測模型。 2．將69例AS患者分為活動期(53例)與非活動期(16例)、HLA—B27陽性(35例)與陰性(34例)、有無髖關(guān)節(jié)受累及有無眼炎等幾種類型，同樣

3、采用BiomarkerWizard及BiomarkerPattern軟件建立診斷預測模型，用于預測AS疾病進展及判斷病情活動。 結(jié)果： 1．AS患者與健康對照者比較，經(jīng)BiomarkerWizard軟件初步篩選得到27個差異表達的蛋白質(zhì)(P＜0.05)，有14個在AS中表達上調(diào)，13個表達下調(diào)。其中，按P值從小到大前5位差異蛋白質(zhì)中，質(zhì)荷比(M/Z)為8085、7972、6197和8133的蛋白質(zhì)在AS中表達上調(diào)，而33

4、51表達下調(diào)。經(jīng)BiomarkerPattern軟件進一步分析，由8085、2640和2932建立的診斷模型Ⅰ診斷AS的靈敏度為94.23％(65/69)，特異度為100％(12/12)。 2．活動期與非活動期AS患者比較，篩選出30個差異表達的蛋白質(zhì)(P＜0.05)，有14個在活動期AS中表達上調(diào)，16個表達下調(diào)。其中，按P值從小到大前5位差異蛋白質(zhì)中，M/Z為3677、3880、2539、5439和3972的蛋白質(zhì)在活動期A

5、S中表達下調(diào)，而在非活動期AS中表達上調(diào)。由3677、3880、2539、3159和3242建立的診斷模型Ⅱ判斷AS病情活動的靈敏度為98.11％(52/53)，特異度為100％(16/16)。 3．無外周關(guān)節(jié)受累與有外周關(guān)節(jié)受累的AS患者比較，有3個蛋白質(zhì)表達具有顯著性差異，按P值從小到大M/Z分別為4700、8687和18538，其中，4700和18538在有外周關(guān)節(jié)受累的AS中表達上調(diào)，而8687在無外周關(guān)節(jié)受累的AS中表

6、達上調(diào)。由這三個蛋白質(zhì)建立的診斷模型Ⅲ預測AS是否有外周關(guān)節(jié)受累的靈敏度為80.00％(28/35)，特異度為82.35％(28/34)。 4．AS與RA患者比較，篩選出23個差異表達的蛋白質(zhì)，有14個在AS中表達上調(diào)，9個表達下調(diào)。其中，按P值從小到大前5位差異蛋白質(zhì)中，M/Z為8133、10259、7972和8085的蛋白質(zhì)在AS中表達上調(diào)，而3108表達下調(diào)。由10259、7972、2048、2154和2954建立的診斷模

7、型Ⅳ區(qū)分AS和RA的靈敏度為100％(69/69)，特異度為100％(10/10)。 5．AS與OA患者比較，篩選出7個差異表達的蛋白質(zhì)，有3個在AS中表達上調(diào)，按P值從小到大M/Z分別為2890、3972和10259，有4個表達下調(diào)，M/Z分別為3108、5336、5439和8565。由3108、2890和5439建立的診斷模型Ⅴ區(qū)分AS和OA的靈敏度為95.65％(66/69)，特異度為100％(6/6)。 結(jié)論：

8、 通過SELDI—TOF—MS技術(shù)建立的血清蛋白質(zhì)指紋圖譜可有效篩選出AS患者血清中的特異性蛋白質(zhì)標志物，這些蛋白質(zhì)可能在AS發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，為AS的早期診斷，預測疾病進展和判斷病情活動提供了可靠的技術(shù)平臺。 第二部分：ELISA方法測定強直性脊柱炎患者血清MMP-3、SAA表達水平 目的： 通過檢測AS患者血清中基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)和血清淀粉樣蛋白A(SAA)的表達水平，分析其與AS疾

9、病活動的相關(guān)性，并初步探討它們在AS發(fā)病機制中的可能作用。 方法： 1．應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定72例初次就診的AS患者和20例健康對照者血清MMP-3和SAA表達水平。 2．進一步按照目前國際上公認的判斷病情活動標準將AS患者分為活動期(54例)與非活動期(18例)，按照影像學改變分為骶髂關(guān)節(jié)X線Ⅰ—Ⅱ級(20例)、Ⅲ級(35例)及Ⅳ級改變(17例)，比較不同分組中二者的表達差異。 3．分

10、析血清MMP-3、SAA表達水平與AS疾病活動指標如強直性脊柱炎疾病活動指數(shù)(BASDAI)、強直性脊柱炎功能指數(shù)(BASFI)、血沉(ESR)和C反應(yīng)蛋白(CRP)等之間的相關(guān)性。 結(jié)果： 1．AS患者血清MMP-3水平與健康對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.053)，血清SAA水平顯著高于正常對照組(P=0.001)。 2．活動期AS患者血清MMP-3水平顯著高于非活動期AS患者(P＜0.05)及健康對照組

11、(P＜0.05)，而非活動期AS患者血清MMP-3水平與健康對照組比較無顯著差異(P＞0.05)。不同骶髂關(guān)節(jié)X線分級的AS患者血清MMP-3水平無顯著差異(P=0.859)。 活動期AS患者血清SAA水平顯著高于非活動期(P＜0.001)及健康對照組(P＜0.001)，而非活動期AS患者血清SAA水平與健康對照組比較無顯著差異(P=0．051)。AS患者血清SAA水平在骶髂關(guān)節(jié)X線Ⅲ級改變時顯著高于Ⅰ—Ⅱ級改變(P＜0.001

12、)，而Ⅰ—Ⅱ級與Ⅳ級、Ⅲ級與Ⅳ級之間血清SAA水平無顯著差異(P=0.051、P=0.081)。 3．AS患者血清MMP-3水平與BASDAI(r=0.295，P=0.015)、BASFI(r=0.253，P=0.037)、ESR(r=0.530，P＜0.001)、CRP(r=0.433，P＜0.001)和SAA(r=0.533，P=0.001)顯著相關(guān)，而與病程、病人總體評估(PGA)、夜間痛、脊柱痛、脊柱炎癥、強直性脊柱炎測

13、量指數(shù)(BASMI)、肌腱端指數(shù)(EI)、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)和擴胸度無相關(guān)性。 AS患者血清SAA水平與BASDAI(r=0.456，P＜0．001)、BASFI(r=0.353，P=0.002)、PGA(r=0.365，P=0.002)、脊柱炎癥(r=0.244，P=0.039)、BASMI(r=0.384，P=0.001)、擴胸度(r=0.254，P=0.032)、ESR(r=0.469，P＜0.001)和CRP(r=0.533，P