豬冷凍精液稀釋液配方正交旋轉(zhuǎn)設(shè)計(jì)篩選研究.pdf

1、本試驗(yàn)通過二次正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)，以冷凍解凍后精子的活率、質(zhì)膜完整性、頂體完整率、存活時間等作為評定標(biāo)準(zhǔn)，研究了豬精液冷凍稀釋液對精子的保護(hù)作用，糖物質(zhì)在精子冷凍過程中的作用，解凍液對精子凍后的影響，解凍速率的選擇，及SDS(十二烷基硫酸鈉)、蔗糖和咖啡因三種有利因子的添加對精子凍后活率和形態(tài)的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果表明： 1.在八種稀釋液中I號稀釋液冷凍后精子活率(33±1.2)％優(yōu)于其它組(P<0.05)；V號解凍液凍后精子活率(34

2、±2.4)％極顯著高于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ號解凍液(P<0.01)，Ⅴ號解凍液凍后精子存活時間(506.6±40.4)極顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號解凍液(P<0.01)；以27.5℃/s的速率解凍，凍后精子各項(xiàng)指標(biāo)均為最高值。 2.蔗糖66.7％替代乳糖，精子凍后活率優(yōu)于其它組(P<0.05)；蔗糖66.7％替代，海藻糖100％替代，精子凍后質(zhì)膜完整率顯著高于其它組(P<0.05)；精子凍后項(xiàng)體完整率，海藻糖替代組優(yōu)于(P<0.05)蔗糖替代組

3、；精子凍后畸形率和存活時間，各組差異不顯著(P>0.05)。說明稀釋液中兩種雙糖的協(xié)同保護(hù)作用優(yōu)于單一雙糖在精子冷凍保存過程中的保護(hù)作用。 3.采用二次正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)對豬精液冷凍稀釋進(jìn)行優(yōu)化，建立精液凍后即時活率(Y1)、1h后的活率(Y2)和存活時間(Y3)對十二烷基硫酸鈉SDS(X1)、蔗糖(X2)及咖啡因(X3)3個試驗(yàn)因子的正交回歸模型： Y1=0.41363+0.07379X1+0.01641X2-0.034

4、98X3-0.02376X12-0.02729X22-0.02022X32+0.02250X11X3； Y2=0.48291+0.11593X1-0.03258X3-0.05545X12-0.018X22-0.03X2X3 Y3=402.53041+87.95723X1+24.07705X2-24.87991X12-13.74297X22-23.00000X1X3。 從模型推知，當(dāng)SDS為0.25％，蔗糖為15g/L，咖

5、啡因?yàn)?mmol/L時，凍后活率達(dá)最大值0.47；當(dāng)SDS為0.20％，蔗糖為30g/L，咖啡因?yàn)?mmol/L時，精子解凍1h后活率達(dá)最大值0.63；當(dāng)SDS為0.25％，蔗糖為24g/L，咖啡因?yàn)?mmol/L時，凍后存活時間達(dá)最大值555.47min：實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)測值相符。 說明稀釋液中添加SDS和蔗糖會改善精子凍后品質(zhì)，咖啡因在冷過程中的保護(hù)作用不大。 4.應(yīng)用正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)研究豬精子凍后形態(tài)試驗(yàn)中，建立精子凍

6、后畸形率(Y4)和頂體完整率(Y5)對SDS(X1)、蔗糖(X2)及咖啡因(X3)3個試驗(yàn)因子的正交回歸模型：Y4=49.60221+1.43982x1-1.69611x3-1.85979x21+3.33750x1x2+1.96250x2x3Y5=47.24067+11.63578X1-2.08687X3-3.21487X21-2.10117X22。 有模型推知，當(dāng)SDS為0.20％，蔗糖和咖啡因?yàn)?mmol/L時，畸形率可達(dá)最