豬精液超低溫冷凍保存的研究.pdf

1、為了進(jìn)一步提高豬冷凍精液解凍后的品質(zhì)，采用手握法采集成年種公豬精液，配制不同的常溫稀釋液作凍前預(yù)處理，經(jīng)冷凍保存后再用不同的解凍液和解凍方法進(jìn)行解凍，比較了0.25 mL細(xì)管凍精和5 mL大管凍精解凍后的精子活力；此外，還對(duì)甘油平衡時(shí)間、甘油濃度、液氮面平衡高度進(jìn)行了研究。結(jié)果如下： 實(shí)驗(yàn)1．豬0.25 mL細(xì)管凍精研究 使用0.25 mL細(xì)管作為冷凍載體對(duì)豬精液進(jìn)行冷凍保存研究。以Zo，BTS，schonow Ⅰ液分別

2、作為預(yù)稀釋液和解凍液，并比較不同的預(yù)處理方法及預(yù)處理稀釋液、解凍液、液氮面平衡高度及解凍溫度等對(duì)冷凍效果的影響。結(jié)果表明，Zo，BTS和Schonow Ⅰ液作為預(yù)稀釋液時(shí)，預(yù)稀釋組精液冷凍效果普遍優(yōu)于不稀釋組，而Zo和S液作為預(yù)稀釋液的效果優(yōu)于BTS液。而作為解凍液Zo和Schonow Ⅰ液的效果差異不顯著，但兩組的解凍效果均優(yōu)于BTS組。液氮面平衡高度為5 cm時(shí)，最適合0.25 mL細(xì)管的降溫方案。在Ⅰ液中于5℃下平衡效果優(yōu)于在8℃

3、下平衡。解凍時(shí)，于37℃水浴解凍30s效果最好。該研究最終確立優(yōu)化的豬精液冷凍方案為：精液采集后以等溫Zo液進(jìn)行預(yù)稀釋，室溫平衡1h，加入冷凍Ⅰ液后于5℃水浴平衡1.5 h，再加入冷凍Ⅱ液，使最終甘油濃度為3％，平衡2 h后裝管，置于液氮面上5 cm處平衡20 min后投入液氮；解凍時(shí)，37℃水浴30s。以此法冷凍豬精液解凍后精子活力可達(dá)0.45。 實(shí)驗(yàn)2．豬5 mL大管凍精研究 使用5 mL大管作為冷凍載體對(duì)豬精液進(jìn)行

4、冷凍保存研究，比較不同甘油濃度、液氮面平衡高度與解凍溫度對(duì)冷凍效果的影響。結(jié)果表明，對(duì)于豬5 mL大管，3 cm處平衡最為合適，解凍時(shí)以52℃水浴解凍40s的效果最佳；2％與3％的甘油濃度對(duì)凍后精子活力影響不大。但大管凍精在最優(yōu)方案下只能得到0.21的活力，冷凍效果明顯不及細(xì)管凍精。 實(shí)驗(yàn)3．豬冷凍精液的體外受精試驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)用0.25 mL細(xì)管凍精進(jìn)行體外受精研究，并與豬鮮精豬進(jìn)行比較。結(jié)果表明冷凍精液體外受精卵裂率和正

5、常16細(xì)胞的發(fā)育率分別為54.3％和48.2％，與鮮精對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)4．LDL作為冷凍保護(hù)劑的應(yīng)用嘗試對(duì)從卵黃中提取低密度脂蛋白(LDL)進(jìn)行方法學(xué)研究，成功從卵黃中提取LDL，并將其應(yīng)用于精液冷凍保護(hù)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，在應(yīng)用中未能克服LDL，不溶于水的問(wèn)題，未能成功將LDL作為冷凍保護(hù)劑應(yīng)用于精液冷凍；LDL的添加使用并沒(méi)有能達(dá)到冷凍保護(hù)作用；使用簡(jiǎn)易的富含LDL，的卵黃離心液進(jìn)行冷凍，發(fā)現(xiàn)其也沒(méi)有比普通卵黃表