韭菜遲眼蕈蚊卵黃蛋白的生化特性、純化及卵黃發(fā)生的激素調(diào)控.pdf

1、本文對(duì)韭菜遲眼蕈蚊Bradysia odoriphaga卵黃蛋白的生化特性、純化和卵黃發(fā)生的激素調(diào)控進(jìn)行了初步研究,旨在闡述其卵黃發(fā)生的激素調(diào)控機(jī)制和探明該卵黃蛋白與其他雙翅目昆蟲卵黃蛋白之間的關(guān)系。 利用native-PAGE和SDS-PAGE對(duì)韭菜遲眼蕈蚊卵、卵巢、血淋巴和脂肪體中的卵黃(原)蛋白進(jìn)行了鑒定,PAGE測(cè)得卵黃原蛋白(Vg)和卵黃蛋白(Vn)的分子量分別是138.85kDa和148.38kDa,SDS-PAGE

2、測(cè)得卵黃蛋白和卵黃原蛋白均由3個(gè)分子量相同的亞基組成,分別是75.47kDa、41.49kDa和39.54kDa。 先利用硫酸銨沉淀法濃縮卵黃蛋白樣品,再經(jīng)凝膠過(guò)濾層析和陰離子交換層析進(jìn)一步純化卵黃蛋白,最后經(jīng)PAGE鑒定得到兩條蛋白帶,其中分子量較小的蛋白為目的蛋白Vn,另一條則是一種分子量約440kDa的蛋白。兩條蛋白帶始終沒(méi)有分離的趨勢(shì),推測(cè)這兩種蛋白存在某種特殊聯(lián)系,而且440kDa蛋白的分子量約是Vn的3倍,有可能是V

3、n的三聚體。 用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定了蚊蠅醚、早熟素Ⅱ(抗保幼激素)和植物源蛻皮激素處理的白蛹在不同發(fā)育時(shí)期脂肪體和卵巢內(nèi)卵黃(原)蛋白的動(dòng)態(tài),分析了外源激素對(duì)脂肪體和卵巢中卵黃原蛋白合成與吸收的影響。蚊蠅醚(0.8μg/μl)能促進(jìn)脂肪體合成卵黃原蛋白和卵巢攝取卵黃蛋白；早熟素Ⅱ通過(guò)作用于咽側(cè)體抑制保幼激素合成使脂肪體卵黃原蛋白的合成受阻,使卵巢內(nèi)卵黃蛋白沉積減少；而蛻皮激素則對(duì)卵黃蛋白的合成也有一定的促進(jìn)作用。