扶正祛瘀中藥對體外培養(yǎng)子宮肌瘤細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9及其抑制物TIMP-1表達(dá)的影響.pdf

1、　　目的：本實(shí)驗(yàn)由中醫(yī)理論指導(dǎo),結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù),對扶正祛瘀法防治子宮肌瘤(uterine leiomyoma,UL),扶正祛瘀中藥—理沖湯對體外培養(yǎng)子宮肌瘤細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)代謝的重要調(diào)節(jié)酶基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及其基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,T

2、IMP-1)表達(dá)的影響進(jìn)行觀察和分析。探討扶正祛瘀中藥對子宮肌瘤細(xì)胞分子水平的影響及其對腫瘤細(xì)胞的抑制作用的機(jī)理,為中醫(yī)藥治療子宮肌瘤提供新的切入點(diǎn)和研究思路,為其臨床防治及其他相關(guān)科學(xué)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：用wistar大鼠制備帶藥血清,將大鼠隨機(jī)分為空白對照組、理沖湯高、低劑量組和化藥對照組,每日2次進(jìn)行灌胃給藥,間隔6h,連續(xù)灌胃2天?？瞻讓φ战M大鼠每日灌以蒸餾水。第3天給藥2 h后再次給藥,1 h后用10%水合氯

3、醛腹腔注射麻醉大鼠,心臟采血。離心取上清液,滅活并微孔濾膜過濾除菌分裝后,-20℃保存?zhèn)溆?。?個(gè)月均未接受過激素和其他藥物治療的行子宮肌瘤全切術(shù)患者進(jìn)行取材,選擇肌瘤組織中間部分采用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞傳代后待第二代細(xì)胞生長貼壁達(dá)80%后調(diào)整細(xì)胞濃度接種至6/24/96孔板,分為正常對照組、空白對照組、理沖湯高、低劑量組和化藥對照組,用大鼠含藥血清進(jìn)行各組對應(yīng)給藥。倒置顯微鏡下HE染色法觀察細(xì)胞形態(tài),CCK-8法檢測細(xì)胞

4、增殖能力和腫瘤細(xì)胞抑制率,蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)技術(shù)檢測體外培養(yǎng)子宮肌瘤細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9及其抑制因子TIMP-1的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：(1)HE染色光鏡下觀察：正常體外培養(yǎng)的子宮肌瘤細(xì)胞呈梭形,核仁清晰,胞漿透明飽滿,與空白對照組相比,理沖湯高、低劑量組和化藥對照組的細(xì)胞均出現(xiàn)不同程度的沙化及胞漿萎縮乃至細(xì)胞死亡的狀況。
　　(2)CCK-8檢測對腫瘤細(xì)胞增值的影響：與空白對照組相比

5、,理沖湯高、低劑量組及化藥對照組OD值均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(3)蛋白質(zhì)印跡(western blotting)技術(shù)觀察結(jié)果：
　　MMP-9：與空白對照組比較,理沖湯低劑量組、化藥對照組MMP-9的陽性表達(dá)均明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而與空白對照組比較,理沖湯高劑量組MMP-9的陽性表達(dá)雖有所降低,但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與化藥對照組相比,理沖湯高、低劑量組均無顯著差異；
　　TIMP-1：與空

6、白對照組比較,理沖湯高劑量組、低劑量組及化藥對照組的TIMP-1的陽性表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與化藥對照組相比,理沖湯高、低劑量組均無顯著差異。
　　結(jié)論：扶正祛瘀中藥理沖湯能明顯改變體外培養(yǎng)子宮肌瘤細(xì)胞的形態(tài),對其生長和增殖有顯著抑制作用,能降低基質(zhì)金屬蛋白酶 MMP-9 和升高其抑制物TIMP-1在體外培養(yǎng)子宮肌瘤細(xì)胞外基質(zhì)中的表達(dá)水平；MMP-9和TIMP-1在子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,參與子宮肌瘤的發(fā)病機(jī)制