溫度、高效氯氰菊酯對(duì)東亞小花蝽(Orius sauteri)捕食功能及體內(nèi)HSPs的表達(dá)水平影響.pdf

1、東亞小花蝽（Orius sauteri）是田間重要的捕食性天敵昆蟲之一，本研究室多年監(jiān)測(cè)大豆田天敵昆蟲發(fā)生情況的結(jié)果表明，在東北地區(qū)，小花蝽具有發(fā)生早、田間控制害蟲時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn)，是早期控制薊馬、蚜蟲的主要天敵，是一類很有利用價(jià)值的天敵昆蟲。目前，我國(guó)在農(nóng)事操作、田間管理過(guò)程中，由于化學(xué)農(nóng)藥的施用，大大影響了小花蝽固有的的生物防治效果。為了更好的減少農(nóng)藥的使用，降低環(huán)境危害，本文著重研究了田間外界因素對(duì)東亞小花蝽的捕食功能與體內(nèi)抗逆蛋白表

2、達(dá)水平的影響，為更好的利用天敵昆蟲進(jìn)行生態(tài)農(nóng)業(yè)提供參考。
　　本研究選取東亞小花蝽成蟲為供試材料，對(duì)其于不同溫度、不同農(nóng)藥梯度下捕食量情況、種內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)捕食功能參數(shù)等進(jìn)行分析研究，并通過(guò)提取蟲體總RNA、利用RT-PCR和RACE技術(shù)，克隆得到熱休克蛋白基因hsc70、hsp70、hsp90基因全長(zhǎng)，經(jīng)原核表達(dá)及Western-blot驗(yàn)證了克隆基因的正確后，采用Real-time PCR技術(shù)，分析了在不同溫度(10℃、18℃、26℃

3、、34℃、42℃)下、不同高效氯氰菊酯濃度(CK、LC25、LC50、 LC75)下，及這兩種因子共同脅迫作用下，對(duì)東亞小花蝽體內(nèi)hsc70、hsp70、hsp90的表達(dá)量水平影響。通過(guò)試驗(yàn)分析確定了東亞小花蝽最適捕食溫度為26℃，東亞小花蝽成蟲處理一頭大豆蚜所需的時(shí)間(Th)以26℃時(shí)最短(0.0549 d)，18℃時(shí)最長(zhǎng)(0.1155 d);捕食上限以26℃時(shí)最大（18.2頭），18℃時(shí)最?。?.65頭）;瞬間攻擊率(a)以26℃時(shí)

4、最大(1.3122)，34℃時(shí)最小(0.6160)。在供試農(nóng)藥濃度梯度范圍內(nèi)，東亞小花蝽成蟲處理一頭大豆蚜所需的時(shí)間(Th)以0 mg/L時(shí)最短(0.0549d)，140 mg/L時(shí)最長(zhǎng)(0.15 d)，其中在農(nóng)藥梯度在40 mg/L下時(shí)，處理一頭大豆蚜所需的時(shí)間(Th)為0.0824 d，是0mg/L的1.5倍;捕食上限40 mg/L下為12.1359，約是0mg/L的2/3，且隨著農(nóng)藥濃度的增加捕食上限也大幅度下降;農(nóng)藥脅迫下，40

5、 mg/L下為0.3845，約是0 mg/L的2/7，且隨著農(nóng)藥濃度的增加瞬間攻擊率(a)也大幅度下降。
　　本研究獲得了hsc70、hsp70、hsp90基因全長(zhǎng)分別2207 bp、2286 bp、2433 bp，GeneBank登錄號(hào)分別為:KJ573768、KJ867518、KJ573769。預(yù)測(cè)分子量為71.57 KDa、69.82 KDa、83.05KDa，與SDS-PAGE及Western-blot所得結(jié)果相吻合。Re

6、al-time PCR結(jié)果表明，在供試溫度梯度下，hsc70表達(dá)量顯著升高，分別是26℃的7～23倍，其各處理之間差異顯著(P＜0.05);hsp70表達(dá)量也顯著升高，最高可達(dá)到26℃的38.69倍。當(dāng)溫度升高或降低波動(dòng)較范圍較小時(shí)，東亞小花蝽體內(nèi)hsc70、hsp90表達(dá)量上調(diào)倍數(shù)比hsp70表達(dá)量大，而當(dāng)環(huán)境溫度升高或降低波動(dòng)劇烈時(shí)，其體內(nèi)的hsp70表達(dá)量比hsc70、hsp90更容易被誘導(dǎo)升高，表現(xiàn)為hsp70表達(dá)水平是26℃下

7、的30～40倍。在供試農(nóng)藥處理梯度下，以LC25濃度處理蟲體與對(duì)照組相比較，hsc70大量表達(dá)，而hsp90表達(dá)量下降;10℃，42℃下，農(nóng)藥處理抑制的hsp70轉(zhuǎn)錄，表達(dá)量水平下降;隨著農(nóng)藥濃度的增加hsp70、hsp90表達(dá)量顯著升高，而hsc70表達(dá)量下降。本試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明東亞小花蝽對(duì)一定溫度范圍內(nèi)對(duì)高溫、低溫具有抗逆性，然而農(nóng)藥的施用會(huì)降低其體內(nèi)抗逆蛋白HSPs的表達(dá)，從而降低了對(duì)不良自然環(huán)境的適應(yīng)，影響其正常的生物防治效果。因此