非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)膀胱癌T-24細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的: 探討非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)膀胱癌T-24細(xì)胞增殖的影響,非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)與CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)有無(wú)區(qū)別。
　　方法: 對(duì)膀胱癌 T-24細(xì)胞采取非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)在(37℃、大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱(稱為大氣-B組)和(37℃、5％CO2)培養(yǎng)箱(稱為 CO2-B組)條件下,及CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)在(37℃、大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱(稱為大氣-A組)和(37℃、5%CO2)培養(yǎng)箱(稱為CO2-A組)條件下進(jìn)

2、行培養(yǎng),檢測(cè)分析兩種體系培養(yǎng)基連續(xù)7天pH的比較;采用細(xì)胞增殖曲線及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)差異情況;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析兩種系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞周期及凋亡率影響的比較;并使用RT-PCR、Western blot技術(shù)檢測(cè)分析兩種系統(tǒng)下的膀胱癌細(xì)胞中survivin、caspase-3基因及蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果: 1、pH值:非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)(37℃、大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基與CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)(37℃、5%CO

3、2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基連續(xù)7天pH值穩(wěn)定在7.4左右(P>0.05);而CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)(37℃、大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基pH值在8.8左右,其高于CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)(37℃、5%CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基pH值(P<0.05)。
　　2、細(xì)胞克隆數(shù):大氣-B組細(xì)胞克隆數(shù)(324±11)與CO2-A組(320±15)細(xì)胞克隆數(shù)基本相同(P>0.05);而大氣-A組細(xì)胞克隆數(shù)(66±6)比CO2-A組細(xì)胞克隆數(shù)減少

4、(P<0.05)。
　　3、細(xì)胞生長(zhǎng)增殖曲線:大氣-B組與CO2-A組細(xì)胞生長(zhǎng)增殖趨勢(shì)基本一致(P>0.05);而大氣-A組比CO2-A組細(xì)胞生長(zhǎng)增殖下降(P<0.05)。
　　4、細(xì)胞凋亡率:細(xì)胞在大氣-B組與CO2-A組條件下培養(yǎng),隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞凋亡數(shù)增加,凋亡率相比無(wú)明顯變化(P>0.05);而在大氣-A組條件下比CO2-A組條件下細(xì)胞凋亡數(shù)增加(P<0.05)。
　　5、RT-PCR及Western b