茶多酚聯(lián)合表柔比星對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞增殖和凋亡的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：據(jù)美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)《2015年癌癥統(tǒng)計(jì)》稱，2015年膀胱癌新增病人約56320，繼續(xù)居男性新發(fā)腫瘤第4位，死亡病例約11510例。在所有這些病例中約70％以上為淺表性膀胱癌。目前對(duì)淺表性膀胱癌最主要的治療手段是經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除加術(shù)后灌注化療，但術(shù)后易復(fù)發(fā)，術(shù)后灌注化療是影響膀胱癌復(fù)發(fā)的一個(gè)重要因素。如何提高化療效果是目前臨床亟待解決的科學(xué)問題。表柔比星（epirubicin，EPI)是膀胱癌的常用灌注化療藥物，茶多酚（polyph

2、enols，TP)是一個(gè)重要的化療增敏劑，本研究通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，研究TP增強(qiáng)EPI誘導(dǎo)膀胱癌T24細(xì)胞凋亡的機(jī)制，為茶多酚聯(lián)合表柔比星治療膀胱癌的臨床應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：取不同濃度TP和EPI分別作用膀胱癌T24細(xì)胞24 h，經(jīng)MTT試驗(yàn)初篩，選擇藥物作用濃度TP（88.8μmol/L）和EPI（4.6μmol/L）。試驗(yàn)分空白對(duì)照組、TP組（88.8μmol/L）、EPI組（4.6μmol/L）、聯(lián)合組（TP8

3、8.8μmol/L+EPI4.6μmol/L）共4組分別處理對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期T24細(xì)胞24 h，用Annexin V-PI雙流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率；處理T24細(xì)胞8 h后，在透射電鏡觀察各組細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)自噬體的生成及變化；處理穩(wěn)定表達(dá)GFP-LC3的T24細(xì)胞8 h后，在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白LC3熒光斑的形成與變化；處理T24細(xì)胞不同時(shí)間，用Western blot技術(shù)檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ（8 h）、P62（8 h），凋亡

4、相關(guān)蛋白CASP3（16 h）、 PARP（16 h）表達(dá)變化；
　　結(jié)果： TP（88.8μmol/L）、EPI（4.6μmol/L）聯(lián)合處理組較單藥組引起的細(xì)胞增殖抑制率(F=730.411, P=0.000)和細(xì)胞凋亡率（ F=161.945, P=0.000）顯著提高。EPI（4.6μmol/L）單藥處理T24細(xì)胞可以誘導(dǎo)自噬，電鏡下細(xì)胞質(zhì)內(nèi)自噬體雙層膜結(jié)構(gòu)形成增多；熒光顯微鏡下胞質(zhì)內(nèi)有明顯點(diǎn)狀熒光斑聚集形成，且含熒光斑的