RUNX3基因在膀胱癌T24細胞株中的表達以及對凋亡的影響.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文RUNX3基因在膀胱癌T24細胞株中的表達以及對凋亡的影響姓名：溫機靈申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：周祥福20070528中山大學(xué)碩士學(xué)位論文RUNX3基因在膀胱癌T24細胞株中的表達以及對凋亡的影響可作為預(yù)后預(yù)測因子之一，并有可能作為膀胱癌基因治療的靶點。目前國內(nèi)關(guān)于RUNX3基因在膀胱癌中的研究還是空白，且國內(nèi)外尚未有學(xué)者對RUNX3基因在膀胱癌細胞中重新表達后，對膀胱癌細胞的影響進行報道。本實驗擬應(yīng)用

2、甲基化特異性PCR檢測正常膀胱組織和膀胱癌T24細胞株RUNX3基因啟動子區(qū)域CpG島的甲基化，以明確RUNX3基因在膀胱癌細胞株中因甲基化而不表達。進一步地，在LipefectamineTM2000介導(dǎo)下應(yīng)用含有RUNX3基因的RUNX3EGFPpDest質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膀胱癌細胞株，恢復(fù)RUNX3基因在膀胱癌細胞株中的表達，利用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染情況以及細胞形態(tài)變化，流式細胞儀檢測細胞凋亡情況，以了解RUNX3抑癌基因恢復(fù)表達后對膀胱癌細胞

3、凋亡的影響。探討RUNX3抑癌基因作為膀胱癌潛在的基因治療靶點的應(yīng)用前景。研究目的：l、明確RUNX3基因在正常膀胱組織和膀胱癌T24細胞株的表達情況。2、明確RUNX3基因在膀胱癌T24細胞株中發(fā)生甲基化。3、構(gòu)建含有RUNX3基因的RUNX3一EGFP—pDest質(zhì)粒。4、在Lipefectamine“2000介導(dǎo)下應(yīng)用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膀胱癌T24細胞株，探討RUNX3抑癌基因恢復(fù)表達后對膀胱癌細胞凋亡的影響。方法與結(jié)果一、正常膀胱組織的獲

4、取及細胞培養(yǎng)正常膀胱組織標本取自腎結(jié)石擬行經(jīng)皮腎鏡碎石取石術(shù)患者，患者均無膀胱疾病。在膀胱鏡逆行插管時活檢鉗鉗取正常膀胱組織，05h內(nèi)將獲取的組織液氮速凍后，轉(zhuǎn)80℃冰箱保存。膀胱癌T24細胞株，培育在含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，37。C、5％C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2d一3d換液，長滿8090％傳代。二、RT—PCR檢測正常膀胱組織、膀胱癌T24細胞中RUNX3基因的表達。應(yīng)用總RNA提取純化系統(tǒng)分別抽提2例正常膀胱組織