三氧化二砷對膀胱癌T24細胞Apaf-1及APC基因表達的影響.pdf

1、目的：研究三氧化二砷（As2O3）對膀胱癌T24細胞中凋亡蛋白酶活化因子-1基因(apoptosis protease activating factor-1，Apaf-1)和腺瘤性結腸息肉病相關基因(Adenomatous polyposis coli，APC)表達的影響，并初步探討三氧化二砷作為抗膀胱癌新藥的可行性及可能作用機制。
　　方法：采用噻唑藍（MTT）法檢測膀胱癌T24細胞存活率，觀察As2O3對細胞存活率的影響；用

2、Hoechst33342熒光染色，觀察不同處理條件下凋亡細胞的核形態(tài)變化；原位細胞凋亡檢測法（TUNEL）檢測膀胱癌T24細胞凋亡指數(shù)；Transwell法檢測As2O3對膀胱癌T24細胞侵襲力的影響；半定量RT-PCR法檢測抑癌基因Apaf-1 mRNA、APC mRNA的表達；Western-blotting法檢測抑癌基因Apaf-1蛋白、APC蛋白的表達變化。
　　結果：⑴與空白對照組（As2O30μmol/L）比較，加入不

3、同濃度的As2O3(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L)，作用于T24細胞24、48和72 h后，每時間組內部細胞存活率明顯降低，細胞活性呈劑量依賴性下降。當As2O3濃度為4μmol/L和8μmol/L時，分別作用T24細胞24、48和72 h后，細胞活性呈時間依賴性下降（P<0.05，P<0.01）。⑵Hoechst33342熒光染色觀察，正常對照組細胞呈均勻熒光染色，細胞核形態(tài)規(guī)則圓形或者橢圓形，As2

4、O32μmol/L處理細胞24 h后，可見部分細胞出現(xiàn)致密濃染、核碎裂；與對照組相比，TUNEL檢測As2O3可以明顯促進細胞凋亡，且As2O3對膀胱癌T24細胞的誘導凋亡作用在1μmol/l～8μmol/l濃度范圍內具有劑量和時間依賴性（P<0.05，P<0.01）。⑶Transwell檢測As2O3在0.1μmol/L～0.4μmol/L區(qū)間內可以明顯降低膀胱癌T24細胞的侵襲力，且侵襲力呈劑量依賴性降低（P<0.05，P<0.01

5、）。⑷半定量RT-PCR結果，與對照組比較As2O3在2μmol/L～8μmol/L作用72 h后使膀胱癌T24細胞Apaf-1 mRNA、APC mRNA表達升高，且兩者分別呈現(xiàn)劑量依賴性升高（P<0.05，P<0.01）。⑸Western-blotting結果，與對照組比較As2O3在2μmol/L～8μmol/L作用72 h后使膀胱癌T24細胞Apaf-1蛋白和APC蛋白表達升高，且兩者分別呈現(xiàn)劑量依賴性升高（P<0.05，P<0

6、.01）。
　　結論：①As2O3處于1μmol/L～8μmol/L范圍內時，對T24細胞增殖抑制呈劑量依賴性；同時As2O3濃度為4μmol/L和8μmol/L時，其對T24細胞增殖抑制還存在時間依賴性。②As2O3可以促進膀胱癌T24細胞凋亡且其在1μmol/l～8μmol/l濃度范圍內凋亡率具有有劑量和時間依賴性升高。③As2O3可以降低膀胱癌T24細胞的侵襲力，且As2O3在0.1μmol/L～0.4μmol/L范圍內時，