PPAR-γ2基因pro12Ala多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥關(guān)系的研究.pdf

1、目的:子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis,EMs)是育齡期婦女的一種常見(jiàn)病、多發(fā)病,其發(fā)病率達(dá)10％-15％,近年來(lái)隨著社會(huì)的發(fā)展,其發(fā)病率呈不斷增長(zhǎng)趨勢(shì),主要引起不孕、痛經(jīng)及慢性盆腔痛等,嚴(yán)重危害廣大育齡期婦女的身心健康。為此,探討子宮內(nèi)膜異位癥的確切病因和發(fā)病機(jī)制一直是婦科領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。最近國(guó)際上提出“在位內(nèi)膜決定論”,提出子宮內(nèi)膜異位癥的形成是以在位內(nèi)膜的不同生物學(xué)特性甚至是基因差異為基礎(chǔ)的,即人與人之間基因所致的內(nèi)膜的

2、差異導(dǎo)致了患病率的不同。
　　 PPAR(Peroxisome proliferator activated receptor)是一類(lèi)基因轉(zhuǎn)錄子,屬于核受體超家族成員,在靶基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合特異性反應(yīng)元件(配體)后,與9順視黃酸受體形成異源二聚體而激活轉(zhuǎn)錄過(guò)程,啟動(dòng)數(shù)百種靶基因的表達(dá)。迄今為止,已發(fā)現(xiàn)3種PPAR亞型,即α,β和γ。PPAR-α多在棕色脂肪組織和肝臟中表達(dá),主要參與脂質(zhì)代謝:PPAR-β在許多組織中均有發(fā)現(xiàn),確

3、切作用還不十分清楚:PPAR-γ分為γ1和γ2兩種亞型。PPAR-γ2在多種組織中均有表達(dá),有抑制炎癥反應(yīng)的作用,PPAR-γ2基因的突變可導(dǎo)致其所編碼蛋白構(gòu)象的改變,從而導(dǎo)致蛋白活性降低,失去對(duì)炎癥的抵抗作用。
　　 PPAR-γ2基因是國(guó)外近年開(kāi)始研究的懷疑與內(nèi)異癥遺傳易感性有關(guān)的基因。PPAR-γ2基因定位于3號(hào)染色體短臂的25區(qū),目前已發(fā)現(xiàn)其多種突變,最常見(jiàn)同時(shí)也是研究最多的是外顯子B的第12位密碼子CCA-GCA的錯(cuò)義

4、突變,造成脯氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楸彼?即Prol2-Ala多態(tài)性。體外研究已證實(shí),PPAR-γ可以抑制子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液中單核細(xì)胞的游走,長(zhǎng)期以來(lái)單核細(xì)胞向腹腔游走被認(rèn)為有助于異位內(nèi)膜的生長(zhǎng)。PPAR-γ2基因的突變可導(dǎo)致其所編碼蛋白構(gòu)象的改變,從而導(dǎo)致蛋白活性降低,失去對(duì)炎癥的抵抗作用,PPAR-γ抑制單核細(xì)胞游走的作用降低,因此從理論上講攜帶突變基因的人群可能更易患內(nèi)異癥。本研究旨在探討PPAR-γ-2基因Prol2Ala多態(tài)性與子宮

5、內(nèi)膜異位癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。
　　 方法:病例組:選自2008年4月-2009年6月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院收治的經(jīng)腹腔鏡或剖腹手術(shù)治療,并經(jīng)病理檢查診斷為子宮內(nèi)膜異位癥、年齡在20-45歲的Ⅲ、Ⅳ期的子宮內(nèi)膜異位癥的患者(按照美國(guó)生育學(xué)會(huì)1985年修訂的子宮內(nèi)膜異位癥分期標(biāo)準(zhǔn)r-AFS評(píng)分)134例。對(duì)照組:選擇同期在我院就診的因輸卵管因素不孕而行腹腔鏡檢查或因縱隔子宮行宮腹腔鏡檢查或手術(shù),并且根據(jù)患者臨床表現(xiàn)、體征、輔助檢查、開(kāi)腹

6、或腹腔鏡手術(shù)排除子宮內(nèi)膜異位癥及內(nèi)膜息肉及全身各系統(tǒng)腫瘤的的患者134例,年齡20-45歲；所有入選者均排除系統(tǒng)性紅斑狼瘡、糖尿病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病史及多囊卵巢綜合癥、及肥胖癥等疾病,近期均無(wú)服用激素類(lèi)藥物及免疫抑制類(lèi)藥物史。且入選對(duì)象均為河北省漢族人,無(wú)血緣關(guān)系。
　　 采取試驗(yàn)對(duì)象的肘靜脈血1-2ml,EDTA抗凝,提取全基因組DNA,用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)(PCR-RFLP技術(shù))擴(kuò)增含有CG(P

7、ro12Ala)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的PPAR-γ2基因外顯子轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)的上游調(diào)控區(qū)域,電泳確認(rèn)擴(kuò)增片段,再將擴(kuò)增片段加入特定的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行消化,酶切產(chǎn)物在1.5％瓊脂糖凝膠上加80V恒壓電泳30min,溴乙錠染色,紫外燈下觀察結(jié)果,根據(jù)產(chǎn)物的大小判斷每例樣本的基因型,用直接計(jì)數(shù)法計(jì)算出各等位基因的表型頻率,進(jìn)行x2檢驗(yàn),看是否符合Hard-Weinberg遺傳平衡定律,用x2檢驗(yàn)及OR值分析PPAR-γ2基因Pro12Ala多態(tài)性與子

8、宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系,應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
　　 結(jié)果:
　　 1 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)
　　 對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥組和對(duì)照組中PPAR-γ2基因Pro12Ala CC、CG、GG三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的基因型頻率進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn),結(jié)果均為P>0.05,表明在所選群體中CC、CG、GG三個(gè)位點(diǎn)的等位基因的分布已達(dá)遺傳平衡,可進(jìn)一步進(jìn)行兩組間的卡方檢驗(yàn)。
　　 2子宮

9、內(nèi)膜異位癥組和對(duì)照組PPAR-γE基因Pro12Ala多態(tài)位點(diǎn)基因型頻率及等位基因的頻率分布比較
　　 PPAR-γ2基因Pro12Ala多態(tài)性位點(diǎn)的三種基因型:CC、CG、GG在病例組的攜帶率分別為120(89.55)、13(9.70)、1(0.75),在對(duì)照組分別為125(93.28)、8(5.97)、1(0.75),兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=1.513,P=0.681)。研究表明沒(méi)有發(fā)現(xiàn)PPAR-γ2基因Pro12Ala

10、多態(tài)性與Ⅲ、Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生具有相關(guān)性。C、G等位基因頻率在病例組和對(duì)照組分別為94.40％、5.60％和96.27％、3.73％兩者相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=1.049P=0.306)。將CG及GG基因型合并,以CC基因型作為參照,病例組中CC基因型及G等位基因攜帶(CG+GG)率分別為120(89.55％)、14(10.45％),對(duì)照組中CC基因型及G等位基因攜帶(CG+GG)率分別為125(93.28％)、9(6.72％),

11、與CC基因型相比,攜帶G等位基因的基因型(CG+GG)可能不會(huì)改變Ⅲ、Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn),OR值為0.617(95％CI=0.258-1.479)。研究表明PPAR-γ2基因Pro12Ala多態(tài)性位點(diǎn)可能不是患子宮內(nèi)膜異位癥獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。
　　 結(jié)論:
　　 PPAR—γ2基因Pro12Ala多態(tài)性位點(diǎn)可能與中國(guó)河北漢族育齡期婦女患Ⅲ、Ⅳ子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)不相關(guān),即攜帶G等位基因(CG+GG)可能不會(huì)增加