印楝種仁成分的化學(xué)及活性成分研究.pdf

1、印楝(Azadirachta indica A．JuSS，neem)屬楝科、速生常綠喬木。印楝種仁中含有多種具有生物活性的化合物，其中萜類(lèi)化合物是印楝中所含的最重要的成分，本文研究了印楝種仁中含有的多種化學(xué)成分，并對(duì)萜類(lèi)活性成分進(jìn)行了重點(diǎn)研究。 首次利用常壓水蒸汽蒸餾法得到印楝種仁中的揮發(fā)性成分。采用GC-MS聯(lián)用手段對(duì)種仁中的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析和結(jié)構(gòu)鑒定，共分離了16個(gè)化合物，鑒定出15個(gè)，其中含硫化合物12個(gè)。這些含硫化合物

2、占總揮發(fā)性成分的89.63％，它們可以分為脂肪族的二硫、三硫或四硫化物和硫代雜環(huán)化合物二大類(lèi)。含量最高的丙基，烯丙基三硫化物占總揮發(fā)性成分的55．83％。首次報(bào)道在印楝種仁中含有3-乙基-5-戊基-1，2,4-三硫代環(huán)戊烷和5-乙基-7-戊基-1，2,3,4,6-五硫代環(huán)庚烷二個(gè)新的硫代雜環(huán)化合物。 從印楝種仁中分離得到10個(gè)單體化合物，并鑒定了其中9個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，證實(shí)為azadirachtin I：azadirachtin

3、H；azadirachtin D；azadirachtin A；azadirachtin B；Desacetylnimbin；Desacetylsalannin；nimbin和salannin。在此基礎(chǔ)上采用LC-MS方式分析了印楝素提取物，共分離了17個(gè)化合物，通過(guò)離子阱的一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜碎片鑒定了其中14個(gè)化合物，證實(shí)了印楝種仁提取物中除含有以上9個(gè)化合物外，還含有的三萜類(lèi)化合物為：nimbinolide；salanninolide；

4、isosalanninolide；nimbanal和salannol acetate。 通過(guò)GC-MS方法鑒定出印楝油中的脂肪酸8種，分別是軟脂酸，十七烷酸，硬脂酸，油酸，亞油酸，亞麻酸，花生酸和二十二烷酸。其中含量較高的四種是油酸，亞油酸，硬脂酸和軟脂酸，它們占總脂肪酸化合物的70％。不飽和脂肪酸油酸、亞油酸和亞麻酸的含量占總脂肪酸的64.38％。首次發(fā)現(xiàn)在印楝種仁中還含有軟脂酸(C<,16：0>)和二十二烷酸(C<,22：0

5、>)兩種飽和脂肪酸。 獲得了通過(guò)分級(jí)萃取、硅膠柱層析和重結(jié)晶的手段，從印楝油中獲得具有抗生育活性的化合物的分離和制備方法，該化合物經(jīng)過(guò)UV，IR，<'1>H NMR和<'13>C NMR等手段鑒定為2-十八酸-4-十六酸-2，4-二戊酯。 建立了印楝種仁中最重要的三萜類(lèi)活性成分印楝素的HPLC 分析方法，該方法印楝素標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=485861x，曲線在0.0974μg～3.894μg的濃度范圍之間線性關(guān)系良好。測(cè)

6、定方法的回收率為100.31.％。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.76％(n=5)。最小檢出量為300ng。在此基礎(chǔ)上研究了印楝素的高效提取及精制工藝，采用溶劑沉降法精制印楝素提取物可將印楝素的含量提高到64％。采用活性白土吸附法可去除印楝素提取物中的黃曲霉素，同時(shí)提高印楝素含量，對(duì)比了硅膠、Florisil和C18三種填料的層析法精制印楝素的效果，它們分別能使印楝素含量從11.12％提高到29.30％，41.25％和34.85％，是上柱前粗提

7、取物的的2.6倍，3.7倍和3.1倍。研究了介質(zhì)酸堿性、溫度和紫外光照等因素對(duì)三萜化合物印楝素的穩(wěn)定性的影響，表明紫外光照對(duì)印楝素的穩(wěn)定性影響最大。首次研究了阿魏酸、沒(méi)食子酸、蘆丁和蘆薈苷四種天然紫外光吸收劑對(duì)印楝素紫外光穩(wěn)定性的影響，在添加四種天然紫外光吸收劑的條件下，印楝素的穩(wěn)定性均比未加穩(wěn)定劑時(shí)有所提高，其中蘆薈苷對(duì)印楝素穩(wěn)定性提高的作用最為明顯，它可將印楝素的穩(wěn)定性提高一倍以上。對(duì)比研究了水楊酸苯酯、2,4二羥基苯酮、對(duì)氨基苯甲

8、酸和4,4’二羥基苯酮四種合成低毒紫外光吸收劑對(duì)印楝素的穩(wěn)定性作用，它們的作用的順序是：水楊酸苯酯>2，4二羥基苯酮>>對(duì)氨基苯甲酸>4，4’二羥基苯酮，它們可將印楝素的穩(wěn)定性提高到未添加前的3倍、2.6倍、1.4倍和1.3倍。 首次研究了三萜化合物nimbin和salannin在甲醇溶液中的光氧化性質(zhì)，采用HPLC方法分析了nimbin和salannin的反應(yīng)情況，采用LC-MS方法分析了反應(yīng)產(chǎn)物的生成情況，產(chǎn)物的LC-MS特

9、征離子碎片表明，甲醇溶液中的nimbin在O<,2>條件下經(jīng)紫外光照射，生成了氧化產(chǎn)物nimbinolide和isonimbinolide，甲醇溶液中的salannin在O<,2>條件下經(jīng)紫外光照射，生成了氧化產(chǎn)物salanninolide和isosalanninolide。這些氧化產(chǎn)物的生物活性均高于相應(yīng)的nimbin和salarmin。 成功制備了印楝素提取物微膠囊創(chuàng)新產(chǎn)品，并通過(guò)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，得出最優(yōu)化的微膠囊制備工藝為：