印楝種仁活性成分和活性物質(zhì)的抑菌作用研究.pdf

1、本文以印楝種仁作為原料，用超臨界CO2和常規(guī)溶劑萃取，共得到三種粗提物：超臨界CO2萃取物，乙酸乙酯和石油醚提取物。乙酸乙酯提取物用硅膠柱分離得到8種組分，將其中抑菌效果好的組分再進(jìn)行分離，得到6種成分，分別以番木瓜炭疽、辣椒疫霉、香蕉炭疽等9種植物病原菌為供試菌種進(jìn)行抑菌活性試驗(yàn)，并對(duì)6種活性成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性研究，主要結(jié)果如下： 1、三種粗提物的抑菌活性印楝超臨界CO2、乙酸乙酯和石油醚提取物對(duì)9種供試菌的抑制作用效果不同

2、。生長(zhǎng)速率法表明，超臨界CO2萃取物的平均抑菌活性最強(qiáng)，乙酸乙酯提取物次之，石油醚提取物平均抑菌活性最差，9種供試菌種中辣椒疫霉表現(xiàn)最敏感，3種提取物對(duì)辣椒疫霉的EC50分別為0.2155mg/ml，0.2017mg/ml，1.7458mg/ml。雖然超臨界CO2萃取物對(duì)供試菌的平均抑制作用最強(qiáng)，但萃取率較常規(guī)溶劑的提取率低，相對(duì)應(yīng)的原料消耗最大，因此本試驗(yàn)采用常規(guī)溶劑的提取物進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)。 2、乙酸乙酯提取物分離組分的抑菌活

3、性乙酸乙酯粗提取物經(jīng)硅膠柱的分離，收集到8種組分，分別對(duì)供試菌種進(jìn)行抑菌活性測(cè)驗(yàn)。8種組分中，組分E22～F1抑菌效果最好，與其他組分差異顯著，D1～D17、C6℃9、G15～G35的抑菌效果較差，平均抑制率為14.63％、10.40％和3.80％。各組分的平均抑菌活性大小順序?yàn)椋篍22～F1＞E10～E16＞D20～D27＞G1～G14＞F2～F14＞D1～D17＞C6℃9＞G15～G35。 3、印楝抑菌活性成分的結(jié)構(gòu)研究剔除

4、8種組分中抑菌作用較差的組分D1～D17，C6℃9和G15～G35，對(duì)其他組分進(jìn)行分離凈化，得到6種成分。對(duì)印楝6種成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)研究，研究結(jié)果：G1～G14-4為印楝素A(Aza-a)，分子量720；F2～F14為印楝素B(Aza-b)，分子量662；E10-E16為desacetylnimbin，分子量498；G1～G14-2為desacetylsalannin，分子量554；D20～D27為nimbin，分子量540:E22～E30

5、為salannin，分子量569。 4、印楝6種成分的抑菌活性抑菌活性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)6種成分對(duì)供試菌種均有抑制作用，抑制強(qiáng)度順序?yàn)閟alannin＞desacetylnimbin＞Aza-a＞nimbin＞Aza-b＞desacetylsalannin。當(dāng)濃度為0.4mg/ml時(shí)，抑菌活性最強(qiáng)的為salannin和desacetylnimbin，二者間差異不顯著，進(jìn)一步證明了E22～E30即salannin的抑菌活性。 5、供

6、試菌種對(duì)供試物的敏感性印楝活性物質(zhì)對(duì)供試菌種的抑菌活性結(jié)果表示，對(duì)辣椒疫霉和番木瓜炭疽的平均抑制效果最好，根據(jù)EC50值比較，對(duì)辣椒疫霉的活性順序?yàn)閟alannin＞Az-a＞Az-b＞nimbin＞desacetylnimbin＞desacetylsalannin＞超臨界CO2萃取物＞乙酸乙酯提取物＞石油醚提取物；對(duì)番木瓜炭疽的活性順序?yàn)閟alannin＞desacetylnimbin＞nimbin＞desacetylsalannin

7、＞Az-a＞Az-b＞超臨界CO2萃取物＞乙酸乙酯提取物＞石油醚提取物。試驗(yàn)證明在以上活性物質(zhì)中salannin的抑菌作用最強(qiáng)。 6、6種成分的穩(wěn)定性試驗(yàn)人工模擬一個(gè)自然環(huán)境，對(duì)印楝6種成進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，印楝6種成分極易降解，隨著試驗(yàn)時(shí)間的增大，降解速率明顯增大。在試驗(yàn)條件下，前12小時(shí)的降解率最大，沒(méi)有光照的時(shí)間段降解速度減慢，在24h后印楝素A、印楝素B、deacetylnimbin、deacetylsalan