MAGE-4和MAGE-12基因克隆、表達及腫瘤臨床應(yīng)用前景研究.pdf

1、目的：MAGE是腫瘤特異性抗原CT抗原中的一大家族，它的發(fā)現(xiàn)為腫瘤的主動免疫治療開創(chuàng)了一個新的紀元。多肽疫苗由于特異性強、副作用小、易于控制一直是腫瘤疫苗研究的熱點，而MAGE家族因其在多種腫瘤細胞的特異性表達及在多種組織類型腫瘤細胞的廣泛性表達成為多肽疫苗研究的首選。為此本實驗克隆MAGE-4和MAGE-12用于制備單克隆抗體及多表位腫瘤多肽疫苗。 實驗內(nèi)容：從A375細胞和K562細胞中分別擴增得到MAGE-4和MAGE-1

2、2的全長cDNA并檢測了MAGE-4、MAGE-12和NY-ESO-1在腫瘤細胞系和食管癌及肺癌組織中的表達，構(gòu)建GST-MAGE-4原核表達載體，IPTG誘導(dǎo)表達MAGE-4蛋白，WesternBlot鑒定蛋白并且通過BCA對蛋白定量。生物學(xué)軟件進行抗原肽的理論預(yù)測和分析，為多克隆抗體、單克隆抗體及腫瘤多肽疫苗的制備創(chuàng)造條件。 實驗方法：RT-PCR從A375細胞和K562細胞中分別擴增得到MAGE-4和MAGE-12的全長c

3、DNA，利用半定量RT-PCR檢測了MAGE-4、MAGE-12和NY-ESO-1在腫瘤細胞系和食管癌及肺癌組織中mRNA水平的表達。，純化的蛋白經(jīng)WesternBlot檢測和BCA定量。用BIMAS和SYFPEITHE軟件進行抗原肽的理論預(yù)測和分析。 實驗結(jié)果：1、RT-PCR獲得MAGE-4和MAGE-12的全長cDNA分別為1022bp和1322bp。2、MAGE-4在卵巢癌細胞OVCAR3中不表達，食管癌中表達達60％(

4、18/30)，肺癌中表達達30％(8/28)。MAGE-12在卵巢癌細胞系OC3、OVCAR3中不表達，食管癌中表達達70％(21/30)，肺癌中表達達36％(10/28)。3、成功構(gòu)建原核表達載體pGEX-4T-2-MAGE-4，0.1mMIPTG30℃條件下誘導(dǎo)3小時為理想的誘導(dǎo)的條件，SDS-PAGE電泳和Westernblot結(jié)果證明所獲蛋白為目的蛋白。 實驗結(jié)論：1、原核表達載體pGEX-4T-2-MAGE-4可以高效