腫瘤-睪丸抗原SSX-2、SSX-4、MAGE-A1在胰腺癌和癌旁組織中的表達(dá).pdf

1、目的：胰腺癌是嚴(yán)重威脅人類健康的一種常見惡性腫瘤，發(fā)病率呈逐年增高的趨勢，并有手術(shù)切除率低，術(shù)后復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn),使胰腺癌成為實(shí)體腫瘤中治療效果較差的腫瘤之一。免疫治療的發(fā)展，使它成為胰腺癌綜合治療中有效手段之一。
　　 目前，許多腫瘤相關(guān)抗原已相繼被發(fā)現(xiàn)。其中腫瘤-睪丸抗原(cancer-testisantigen，CTA)研究工作最早源于上世紀(jì)70年代末到80年代初，其在腫瘤組織中的表達(dá)具有以下特征：①同一腫瘤-睪丸(canc

2、er-testis，CT)抗原在不同腫瘤組織的表達(dá)頻率不同；②不同CT抗原在同一腫瘤組織的表達(dá)頻率也不同；③CT抗原的表達(dá)具有“群集性”，即同一腫瘤組織可同時(shí)表達(dá)多種CT抗原?；贑T抗原的這些特征，篩選出各種腫瘤組織中高表達(dá)的CT抗原顯得尤為重要，這將為腫瘤疫苗的制備提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。
　　 為了尋找胰腺癌中高表達(dá)的CT抗原，本實(shí)驗(yàn)檢測并比較了腫瘤-睪丸抗原、滑膜肉瘤X斷裂點(diǎn)基因(synovialsarcomaXbreakp

3、iont，SSX)-2、SSX-4、黑色素瘤抗原(melanomaantigen，MAGE)-A1在胰腺癌以及癌旁組織中的表達(dá)情況，為臨床研制、應(yīng)用腫瘤疫苗提供可靠的理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 選取2008年河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院肝膽外科胰腺癌手術(shù)切除病例26例，癌組織均經(jīng)病理證實(shí)；癌旁組織取自癌緣外2cm以內(nèi)的胰腺組織，且經(jīng)病理證實(shí)；另外選取河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院病理科2005年至2007年間手術(shù)切除、病例資料完整的存

4、檔蠟塊，其中包括癌旁組織15例和胰腺癌52例。病例入組前所有病例的全部切片均由兩位高年資病理醫(yī)師嚴(yán)格按照2000年WHO標(biāo)準(zhǔn)明確診斷復(fù)核。
　　 免疫組織化學(xué)檢測SSX-2、SSX-4、MAGE-A1抗原表達(dá)采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法（即S-P法）。結(jié)果判定按照Volm報(bào)道的判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，根據(jù)以下兩方面的總分進(jìn)行判斷：(1)選染色均勻的陽性表達(dá)區(qū)域，以著色細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的多少分級(jí)。0：無陽性細(xì)胞；1：陽性細(xì)

5、胞數(shù)＜25％；2：陽性細(xì)胞數(shù)26％～50％；3：陽性細(xì)胞數(shù)＞50％。(2)按著色細(xì)胞染色強(qiáng)弱分：0：陰性；1：弱，淡黃色；2：中等，棕黃色；3：強(qiáng)，棕褐色。按(1)、(2)的數(shù)值相加判斷結(jié)果，0～2為陰性（-）：3～4為弱陽性(+)；5～6為強(qiáng)陽性(++)。
　　 RT-PCR檢測CT抗原在胰腺癌組織和癌旁組織中的表達(dá)。使用組織RNA提取試劑盒進(jìn)行總RNA的提取，電泳鑒定后反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并進(jìn)行擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物于1.5％瓊脂糖

6、凝膠中電泳，凝膠分析系統(tǒng)中觀察、照相并進(jìn)行定量分析。
　　 結(jié)果：
　　 1免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果在15例胰腺癌旁組織中腫瘤-睪丸抗原SSX均不表達(dá)，52例胰腺癌中，其陽性表達(dá)率為25例(48.08％)。兩者相比P值小于0.01，表明SSX在癌旁組織不表達(dá)，在癌組織中表達(dá)。兩者存在顯著性差異。腫瘤-睪丸抗原MAGE-A1蛋白在15例癌旁組織中均不表達(dá)，其陽性表達(dá)率為0例(0％)；在52例胰腺癌中，其陽性表達(dá)率為15例(28

7、.85％)，兩者相比P值小于0.05，表明兩者存在顯著性差異。
　　 2RT-PCR結(jié)果以MAGE、SSX-2、SSX-4與GAPDH灰度比值表示各CT抗原mRNA的相對(duì)表達(dá)量。胰腺癌組織和癌旁組織SSX-2/GAPDH灰度比值分別為1.60±0.39和0.76±0.15；SSX-4/GAPDH灰度比值分別為1.46±0.18和0.66±0.15；MAGE/GAPDH灰度比值分別為1.44±0.20和0.80±0.10。三者在胰

8、腺癌中的表達(dá)均顯著高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。SSX-2在胰腺癌中表達(dá)水平比SSX-4，MAGE-A1表達(dá)水平高。
　　 結(jié)論：
　　 結(jié)果顯示：腫瘤-睪丸抗原SSX-2、SSX-4、MAGE-A1在胰腺癌癌旁組織中免疫組織化學(xué)法檢測均未發(fā)現(xiàn)陽性表達(dá)；胰腺癌中，SSX-2、SSX-4、MAGE-A1基因的mRNA及蛋白出現(xiàn)不同頻率的表達(dá)，顯示不同種類的腫瘤-睪丸抗原在胰腺癌中的表達(dá)存在顯著差異，其中