利血平增敏微生物法檢測三種氟喹諾酮類藥物殘留的研究.pdf

1、為探索微生物方法檢測氟喹諾酮類藥物殘留以及利血平增敏氟喹諾酮類藥物效果,最低檢測限降低的程度,本研究以金黃色葡萄球菌(CMCC(B)26003);短小芽孢桿(CMCC(B)63202);大腸桿菌(CMCC(B)44103);枯草芽孢桿菌(CMCC(B)63501);藤黃微球菌(CMCC(B)10240)五種菌為工作菌,建立了三種氟喹諾酮類藥物(恩諾沙星、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星)殘留的微生物法檢測研究,并用利血平增敏三種氟喹諾酮類藥物殘留的

2、研究。 1.三種氟喹諾酮類藥物殘留檢測微生物學方法的建立。1.1最適菌層濃度和培養(yǎng)基pH值的選擇本研究通過測定不同菌層濃度和不同培養(yǎng)基pH值時三種抗生素對五種細菌的抑菌圈直徑及清晰度來確定最適菌層濃度和培養(yǎng)基pH值。結果表明：在本實驗條件下,金黃色葡萄球菌的最適添加濃度為0.35％(5×106CFU/ml)、短小芽孢桿菌的最適添加濃度為0.4％(6×106CFU/ml)、大腸桿菌菌懸液的最適添加濃度為0.2％(12×105CFU

3、/ml)、枯草芽孢桿菌的最適添加濃度為0.2％(6×105CFU/ml),藤黃微球菌的最適添加濃度為0.8％(12×105CFU/ml)以及培養(yǎng)基最適pH值為6.5時可產生直徑最大、邊緣光滑、完整、清晰的抑菌圈。1.2三種氟喹諾酮類藥物在磷酸鹽緩沖液中標準曲線本研究分別制備了三種藥物對五種菌在磷酸鹽緩沖液中的標準曲線。結果表明：各對照品于不同時間分別制備五組工作曲線,其斜率的變異系數(shù)均低于10％,表明其變異程度小、重復性好。對各對照品的

4、五組工作曲線各濃度抑菌圈直徑的校正值求平均值,并以此繪制標準曲線,抑菌圈直徑與藥物濃度的對數(shù)值呈正相關,相關系數(shù)r2均大于0.998。1.3三種氟喹諾酮類藥物在磷酸鹽緩沖液中最低檢測限的測定本研究根據(jù)所添加藥物濃度可產生直徑大于10mm的、明顯的、清晰的抑菌圈為標準來確定最低檢測限。結果表明：同一藥物在不同菌種條件下,最低檢測限各有不同,恩諾沙星的最低檢測限分布在0.063-0.13μg/ml之間、環(huán)丙沙星的最低檢測限分布在0.25-2

5、.0μg/ml之間、左氧氟沙星的最低檢測限分布在0.5-1.0μg/ml之間。 2.利血平混合三種氟喹諾酮類藥物殘留增敏法的研究2.1利血平混合三種氟喹諾酮類藥物在磷酸鹽緩沖液中標準曲線的制備結果表明：各混合液于不同時間分別制備五組工作曲線,其斜率的變異系數(shù)均低于10％,表明其變異程度小、重復性好。對各混合液的五組工作曲線各濃度抑菌圈直徑的校正值求平均值,并以此繪制標準曲線,抑菌圈直徑與藥物濃度的對數(shù)值呈正相關,相關系數(shù)r2均大

6、于0.998。 2.2利血平混合三種氟喹諾酮類藥物在磷酸鹽緩沖液中最低檢測限的測定結果表明：同一藥物在不同菌種條件下,最低檢測限各有不同,利血平混合恩諾沙星的最低檢測限分布在0.0078-0.016μg/ml之間、利血平混合環(huán)丙沙星的最低檢測限分布在0.010-0.063μg/ml之間、利血平混合左氧氟沙星的最低檢測限分布在0.016-0.13μg/ml之間。 本研究建立了利血平增敏氟喹諾酮類藥物殘留的微生物學檢測方法,RSD在