仿生染料親和吸附劑的制備及性能評價.pdf

1、親和色譜是一種高效簡便的蛋白質(zhì)純化分離技術(shù)，對多種蛋白質(zhì)都有很好純化分離效果。親和吸附劑由載體基質(zhì)與親和配體偶聯(lián)而成，影響其分離效果的關(guān)鍵因素是親和配基。染料親和色譜則是親和色譜中用與蛋白分離最重要的色譜之一。仿生染料配基易于合成，化學(xué)物理性能穩(wěn)定，不易被生物降解，已成功的用于分離純化大部分的蛋白質(zhì)和酶，是目前使用最廣泛的一類染料配基。利用生物信息技術(shù)設(shè)計合成出性能更好的染料分子，以彌補(bǔ)現(xiàn)有染料配基特異選擇性不高的缺陷是一項有意義的工作

2、。本文以合成的端基為偶氮基的三嗪染料作為親和配基，殼聚糖多孔微球作為一種親和基質(zhì)，制備了一種新型的仿生染料配基親和吸附劑并考察了其對蛋白質(zhì)的吸附情況，主要做了以下研究工作： 1、以ProcionBlueMX-R為原料，以類甲基橙為端基，以親電取代反應(yīng)合成了一種三嗪染料，命名為活性偶氮綠(簡稱RAG)，并對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。 2、以環(huán)氧氯丙烷為交聯(lián)劑，采用反相乳化交聯(lián)法，在乙酸溶液濃度為2％，油水比為1∶1，致孔劑濃度為0.

3、5％，環(huán)氧氯丙烷濃度為0.04mol/L的條件下制備了粒徑在40μm左右的殼聚糖多孔微球(CS)。該殼聚糖多孔微球?qū)Φ鞍椎姆翘禺愋晕捷^小。 3、以殼聚糖微球為基質(zhì)，采用直接偶聯(lián)法偶聯(lián)ProcionBlueMX-R、CibacronBlueF3GA和自制染料活性偶氮綠(RAG)，制得了三種染料吸附劑CS-PB、CS-CB和CS-RAG，測定了其物理性能，并研究了配基密度的控制以及染料泄漏率等。在較大的配基密度范圍內(nèi)，染料配基的偶

4、聯(lián)率可以通過染料加入量進(jìn)行簡單的控制。實驗表明制得的染料樹脂性能穩(wěn)定，在酸性溶液中染料泄漏率很小。 4、以CS-RAG為親和吸附劑，研究了其對牛血清白蛋白(BSA)及血清白蛋白(HSA)的吸附性能。實驗得出了吸附最佳pH值為5.0，離子強(qiáng)度增大顯著降低BSA的吸附量。作出了吸附等溫線和吸附動力學(xué)曲線，發(fā)現(xiàn)CS-RAG對蛋白的吸附行為可以用Langmuir模型描述。應(yīng)用Langmiur吸附理論及Chase理論模型，計算出了CS-R

5、AG對BSA的最大吸附量qm為47.9958mg/g；解離常數(shù)Kd=0.253465mg/mL(3.783×10-6mol/L)，吸附速率K1為0.02247mL/mg.min。同時對比了CS-CBA、CS-PBA及CS-RAG對BSA的吸附量的大小?？梢钥闯龊铣傻娜玖系臉渲奈搅枯^前兩者稍有提高，并且分析了可能的原因。 5、將CS-RAG應(yīng)用于含有諾氟沙星膠囊的人血清實際樣品中，考察了其對蛋白的去除效果及洗脫條件。用液相色譜