經(jīng)方下瘀血湯調(diào)控ACE2介導(dǎo)的RAS自穩(wěn)抑制肝纖維化進(jìn)展的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：肝纖維化是各種病因所引起的慢性肝損傷所共有的病理改變。如無(wú)有效的治療措施干預(yù)，容易進(jìn)一步惡化為肝硬化出現(xiàn)肝臟功能衰竭，甚至發(fā)展為肝癌。腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）在肝纖維化形成中起著非常重要的作用。研究顯示RAS經(jīng)典的ACE-AngⅡ-AT1R通路活化促進(jìn)肝纖維化形成，而新的RAS通路ACE2-Ang(1-7)-Mas則對(duì)肝纖維化形成起抑制作用，兩者相互作用調(diào)節(jié)肝纖維化的進(jìn)程。ACE2作為關(guān)鍵的調(diào)控因子調(diào)控RAS兩條通路的平衡。

2、盡管相關(guān)研究證實(shí)ACEi類及ARBs類藥物對(duì)緩解肝纖維化進(jìn)展有效，但其對(duì)肝病患者血壓及腎灌注的不良影響限制了這些藥物在肝纖維化防治中的廣泛應(yīng)用。尤其是Sipahi等2010年在《柳葉刀·腫瘤學(xué)》上提出AT1R拮抗劑的使用與近年來(lái)腫瘤發(fā)病率升高有關(guān)，更是增加了AT1R拮抗劑使用的顧慮。然而，相關(guān)研究證實(shí)ACE2的增加不影響正常動(dòng)物的血壓及組織重建，人類重組ACE2制劑對(duì)肝纖維化模型動(dòng)物治療有效，且在一期臨床試驗(yàn)中對(duì)健康志愿者未見(jiàn)明顯副作用

3、。因此，以ACE2為切入點(diǎn)，恢復(fù)或重建RAS自穩(wěn)平衡成為肝纖維化防治的新亮點(diǎn)。我國(guó)應(yīng)用中醫(yī)藥治療肝纖維化有效且其對(duì)肝病患者的血壓及腎灌注無(wú)明顯副作用，在國(guó)際學(xué)術(shù)界獨(dú)樹一幟。臨床研究顯示，經(jīng)典方劑下瘀血湯對(duì)延緩肝纖維化進(jìn)展有良效，然而其抗肝纖維化的具體機(jī)制尚在不斷探索中。
　　目的：探討經(jīng)方下瘀血湯是否通過(guò)恢復(fù)或重建RAS的自穩(wěn)平衡抑制肝纖維化進(jìn)展。
　　方法：27只Wistar大鼠隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組、去除病因組、下瘀

4、血湯組、科索亞組和模型組。除正常對(duì)照組外，各實(shí)驗(yàn)組大鼠背部皮下注射2.5mL/kg40％CCL4橄欖油混懸液造模，以下瘀血湯及科索亞干預(yù)肝纖維化進(jìn)展，通過(guò)HE染色、Masson三色膠原染色和超微病理學(xué)方法觀察肝臟組織結(jié)構(gòu)的改變。采用免疫組織化學(xué)染色法、RTQ-PCR及Western blot法檢測(cè)RAS相關(guān)因子的基因和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：病理結(jié)果顯示：1、去除病因組、下瘀血湯組、科索亞組和模型組肝纖維化程度依次加重。2、正常

5、組RAS各分子基因及蛋白表達(dá)均低于其他組，除去除病因組與正常組比較TGFβ1基因表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）之外，其他組間比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而模型組RAS各分子的基因及蛋白表達(dá)則高于其他組(P<0.05)。3、經(jīng)方下瘀血湯治療組ACE2的基因及蛋白上調(diào)水平(P<0.05)高于科索亞組；而AngⅡ及TGF-β1的基因及蛋白表達(dá)水平低于科索亞組(P<0.05)；ACE蛋白表達(dá)水平低于科索亞治療組(P<0.05)，AC

6、E的基因表達(dá)水平與科索亞組無(wú)顯著性差異(P>0.05)；AT1R基因表達(dá)高于科索亞組，但是差異不顯著(P>0.05)，AT1R蛋白表達(dá)水平高于于科索亞治療組(P<0.05)。
　　結(jié)論：經(jīng)方下瘀血湯可能是通過(guò)增加ACE2的表達(dá)，抑制ACE、AngⅡ和AT1R的表達(dá),從而使RAS中促進(jìn)肝纖維化進(jìn)展的經(jīng)典通路ACE-AngⅡ-AT1R占優(yōu)勢(shì)轉(zhuǎn)變?yōu)橐种评w維化的ACE2-Ang（1-7）-Mas受體軸占優(yōu)勢(shì)，從而抑制肝纖維化進(jìn)展，即調(diào)控以