子宮頸人乳頭狀瘤病毒檢測和治療的實驗研究.pdf

1、目的： 1．評價雜交捕獲二代和流式熒光雜交技術(shù)在子宮頸人乳頭狀瘤病毒(HumanPapillomavirus，HPV)感染檢測及宮頸病變診治中的應(yīng)用價值。 2．探討中藥保婦康栓及主要成分莪術(shù)油對HPVl6的抑制作用。 方法： 1．選擇在中日友好醫(yī)院婦產(chǎn)科宮頸病變診治中心行宮頸癌篩查的細(xì)胞學(xué)診斷異常的患者(≥ASC-US)872例，采用雜交捕獲二代(HC-Ⅱ)進(jìn)行13種高危型HPV的檢測，同時對組織病理學(xué)≥

2、CIN2者采用流式熒光雜交HPV分型檢測法進(jìn)行15種HPV亞型分型檢測，比較不同方法檢測結(jié)果的一致性；按宮頸組織病理學(xué)結(jié)果分為NILM組、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、、宮頸癌組。以組織病理學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，評價高危型HPVDNA檢測在宮頸病變診斷中的應(yīng)用價值。采用Spearman等級相關(guān)分析HPV病毒載量與宮頸病變級別的關(guān)系。計算各HPV亞型在不同病理級別組中的陽性率。 2．以含保婦康栓的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)宮頸癌細(xì)胞系CaSk

3、i和宮頸永生化細(xì)胞系H8，以含莪術(shù)油的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)宮頸癌細(xì)胞系SiHa、CaSki和H8，觀察藥物作用后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(MTT)、流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度藥物對細(xì)胞增殖的影響；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(ReverseTranscriptase Polymerasc Chain Reaction,RT-PCR)檢測人乳頭狀瘤病毒HPV16亞型E6E7mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1．HC-Ⅱ法診斷

4、宮頸高度病變(≥CIN2)的靈敏性、特異性、陽性預(yù)告值、陰性預(yù)告值分別為93.1％、66.8％、59.9％、94.8％。HC-Ⅱ陽性的ASC-US和ASC-H患者中宮頸高度病變的檢出率為28.9％、30.0％，陰性者中檢出率為2.3％，3.7％(P>0.05)。NILM組HPV病毒載量與CIN以及宮頸癌組有顯著性差異(P<0.05)，CIN以及宮頸癌組HPV病毒載量無顯著性差別(P>0.05)。流式熒光雜交與HC-Ⅱ兩種方法對高危型HP

5、V感染的檢出結(jié)果總符合率92.4％，kappa值0.623。流式熒光雜交HPV檢測結(jié)果顯示≥CIN2患者最常見的基因型為16、18、52、58、31。HPV16陽性率隨病變級別的增加迅速上升。CINII組常見HPV亞型16、52、11、18、58、56/66,CINIII組常見HPV亞型16、58、18、52、31，宮頸癌組常見亞型16、18、11、31、52、58。 2．不同濃度的保婦康栓可以抑制宮頸癌細(xì)胞系Caski和宮頸

6、永生化細(xì)胞H8的增殖；在保婦康栓作用下，Caski細(xì)胞G1期減少(P<0.05)，G2、S期增加(P<0.05)，Caski細(xì)胞凋亡率高于對照組(P<0.05)，而對H8細(xì)胞周期和凋亡率影響不明顯；兩種細(xì)胞系HPV16E6E7基因片段mRNA表達(dá)均明顯低于對照組(P<0.01)，無劑量依賴關(guān)系。 3．不同濃度的莪術(shù)油可以抑制細(xì)胞的增殖，莪術(shù)油作用于SiHa細(xì)胞，G1期細(xì)胞減少(P<0.05)，G2、S期細(xì)胞增加(P<0.01)，

7、細(xì)胞阻滯于G2、S期。莪術(shù)油作用于CaSki、H8細(xì)胞，G1期細(xì)胞減少(P<0.01)，S期細(xì)胞增加(P<0.01)，使細(xì)胞阻滯于S期。加藥組SiHa、CaSKi和H8細(xì)胞凋亡率高于對照組，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01，P<0.01，P<0.05)；三種細(xì)胞HPV16E6E7基因片段mRNA表達(dá)均明顯低于對照組(P<0.01)。 結(jié)論： 1．隨著宮頸細(xì)胞學(xué)和組織病理學(xué)級別的升高，高危型HPVDNA的感染率呈趨勢性升高。高危

8、型HR-HPVDNA檢測對于ASC-US有分流作用，對于ASC-H的分流作用有待進(jìn)一步探討。HC-Ⅱ法檢測HR-HPV病毒載量與CIN以及宮頸癌發(fā)生有關(guān)，但與宮頸病變的嚴(yán)重程度無關(guān)。流式熒光雜交技術(shù)與HC-Ⅱ檢測結(jié)果一致性好，是有效的HPV分型檢測方法。HPV 16、18、52、58、31是≥CIN2患者最常見的5種HPV感染亞型。 2．保婦康栓及其主要成分莪術(shù)油可抑制宮頸癌細(xì)胞系SiHa、CaSki以及宮頸永生化細(xì)胞系H8增殖