應用多種方法檢測人乳頭狀瘤病毒與乳腺癌關系的研究.pdf

1、乳腺癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，每年全世界約有130萬人被診斷為乳腺癌，而有約40萬人死于該病。根據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的統(tǒng)計資料（GLOBOCAN2000:CancerIncidence,MortalityandPrevalenceWorldwide,Version1.0）,2000年全球女性乳腺癌的新發(fā)病例超過100萬，標化發(fā)病率為35.66/10萬，標化死亡率為12.51/10萬。從世界范圍來看，乳腺癌已成為全球婦女首發(fā)的惡性腫瘤。

2、近20年來，我國乳腺癌的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢，尤其在京、津、滬等大城市，乳腺癌已位居女性惡性腫瘤發(fā)病率之首，嚴重危害廣大婦女的健康[1]。乳腺癌的病因有很多，包括不育、生育次數(shù)少、第一胎足月產(chǎn)年齡晚、初潮年齡早、良性乳腺疾病史、乳腺癌家族史、放射線暴露等因素已經(jīng)被確認與乳腺癌有關。但是乳腺癌發(fā)生的分子機制尚不完全清楚。因此研究其發(fā)病原因對于人類攻克乳腺癌這一難關有著重要意義。
　　高危型人乳頭狀瘤病毒（HPV）經(jīng)證明是宮頸癌的主

3、要成因，比如HPV16、18、31、33和39。同時，HPV也被認為是其他部位發(fā)生鱗狀細胞癌的原因，比如肛門、外陰和食管[2,3]。1990年，Band等人曾報告HPVDNA可以使人乳腺上皮細胞永生化，減少它們對生長因子的需要[4]。自1992年后，越來越多的研究通過聚合酶鏈反應（PCR）在乳腺癌組織中檢測到高危險的HPV[5-15]。另一方面，尚無證據(jù)表明HPV會感染人體內(nèi)的乳腺組織，迄今為止也沒有報告過HIV/AIDS病人的乳腺內(nèi)發(fā)

4、生HPV感染[16]。
　　此外，眾多的研究已經(jīng)在乳腺癌組織內(nèi)檢測到HPVDNA。這就產(chǎn)生了一個疑問，即HPV是否在乳腺癌中起到了一定的致癌作用。另一方面，人乳頭狀瘤病毒似乎無法在體外感染正常的乳腺細胞，而對于AIDS病人而言，也沒有觀測到人類乳腺感染HPV。當前尚無法解釋這些具有沖突的觀測結果。在乳腺癌的各個致癌階段，有關HPV感染具有的潛在作用應當通過進一步的試驗加以確認。
　　由此，我課題小組結合我科臨床取材方面的優(yōu)勢

5、，收集第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院血管內(nèi)分泌外科2009.3～2010.3乳腺癌組織標本80例，以及乳腺良性病變組織標本80例。80例乳腺癌患者的年齡為35-75歲的女性，中位年齡55.4歲。其中包括44例浸潤性導管癌，20例浸潤性小葉癌，9例小葉原位癌，3例單純癌，2例硬癌，1例髓樣癌，1例腺癌。80例乳腺良性病變患者的年齡為25～67歲的女性，中位年齡43.6歲。其中包括乳房纖維腺瘤57例，乳管內(nèi)乳頭狀瘤23例。我們參考了國內(nèi)外眾多文獻，采

6、用了國際上運用比較廣泛的實時熒光定量PCR（FQ-PCR）的方法，并且同時運用了透射電鏡的方法作為驗證實驗。具體情況如下：
　　1.根據(jù)查閱的國內(nèi)外眾多文獻，最終選取了目前檢出率比較高的HPV16，以及HPV18亞型作為目標亞型，收集第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院血管內(nèi)分泌外科2009.3～2010.3乳腺癌組織標本80例，以及乳腺良性病變組織標本80例。80例乳腺癌患者的年齡為35-75歲的女性，中位年齡55.4歲。其中包括44例浸潤性導

7、管癌，20例浸潤性小葉癌，9例小葉原位癌，3例單純癌，2例硬癌，1例髓樣癌，1例腺癌。80例乳腺良性病變患者的年齡為25～67歲的女性，中位年齡43.6歲。其中包括乳房纖維腺瘤57例，乳管內(nèi)乳頭狀瘤23例。應用實時熒光定量PCR（FQ-PCR）作為檢測方法，同時選擇HPV16以及HPV18全長質粒作為陽性對照，蒸餾水作為陰性對照。
　　2.仍然是上述所收集的乳腺組織，取腫瘤組織，按照所要求的標準制成標本，送我校直基礎部電鏡中心觀察