乳腺浸潤性乳頭狀癌的臨床病理特征研究及Nek2C與乳腺癌的初步研究.pdf

1、第一部分
　　目的:
　　探討乳腺浸潤性乳頭狀癌的臨床病理特征及分子免疫表型，分析浸潤性導(dǎo)管癌與浸潤性乳頭狀癌的無瘤生存及總生存以及乳頭狀癌的四種分子亞型的預(yù)后情況。
　　方法:
　　選取2000年1月至2011年5月共284例浸潤性乳頭狀癌病例。從同期的13428例浸潤性導(dǎo)管癌病例中隨機選取300例。對選取的2003年之前的所有病例做常規(guī)Her2免疫組化染色。比較浸潤性乳頭狀癌和浸潤性導(dǎo)管癌的臨床病理特征及預(yù)后

2、情況。同時COX多因素分析浸潤性乳頭狀癌的無瘤生存及總生存情況，對11例死亡病例探討其浸潤類型、復(fù)發(fā)部位、復(fù)發(fā)時間、復(fù)發(fā)腫瘤分級、轉(zhuǎn)移時間及死亡時間。同時評估浸潤性乳頭狀癌4種分子亞型的臨床病理特征及無瘤生存和總生存。
　　結(jié)果:
　　浸潤性乳頭狀癌與浸潤性導(dǎo)管癌相比，在年齡、腫瘤分級、淋巴結(jié)狀態(tài)、絕經(jīng)狀態(tài)方面有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在腫瘤大小、家族史、放療、化療、內(nèi)分泌治療、分子分型方面，兩者比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0

3、.05)。浸潤性乳頭狀癌的5年總生存率(92.77％vs87.95％)及無瘤生存率(87.95％vs80.72％)均高于浸潤性導(dǎo)管癌。在11例死亡的浸潤性乳頭狀癌中，有4例是純型的，7例混合有其它浸潤成分，如浸潤性導(dǎo)管癌、浸潤性小葉癌、浸潤性微乳頭狀癌。在浸潤性乳頭狀癌的4個分子亞型中，luminalA，luminalB，Her2及三陰型分別占51.06％、17.25％、13.03％、18.66％，其5年總生存率分別為97.78％，92

4、.31％，81.82％，85.71％，5年無瘤生存率分別為95.56％，84.62％，72.73％，78.57％。luminalA型5年總生存率和無瘤生存率均高于其它亞型。
　　結(jié)論:
　　與浸潤性導(dǎo)管癌相比，浸潤性乳頭狀癌的預(yù)后較好，其5年無瘤生存率及總生存率均高于浸潤性導(dǎo)管癌。浸潤性乳頭狀癌的復(fù)發(fā)腫瘤多為中、高分級，且純型的病例死亡率與混合型相比較低。在浸潤性乳頭狀癌的4個亞型中，luminaA型占51.06％，其5年總

5、生存率和無瘤生存率均高于其它亞型，預(yù)后相對最好。
　　目的:
　　為探討NIMA相關(guān)激酶2(NIMA-relatedkinase2，Nek2)的剪接異構(gòu)體Nek2C在乳腺上皮惡性轉(zhuǎn)化中的作用，本實驗在結(jié)合前期研究成果的基礎(chǔ)上，進一步探討乳腺癌發(fā)生發(fā)展模式的不同階段Nek2C的表達水平，分析其在乳腺癌生長、侵襲中的作用及與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，為乳腺癌的診斷、治療等提供新的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法:
　　以國

6、內(nèi)外相關(guān)研究為依據(jù)，在前期的研究基礎(chǔ)上，用乳腺普通增生細胞系MCF10A，不典型增生細胞系MCF10AT，導(dǎo)管內(nèi)癌細胞系MCF10DCIS.com和浸潤性導(dǎo)管癌細胞系MCF10Cal四個細胞系建立乳腺癌的多階段發(fā)生發(fā)展模型。采用RNA干擾技術(shù)對內(nèi)源性Nek2C表達高的細胞系MCF10DCIS.com和MCF10Cal進行干擾，同時將Nek2C質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進內(nèi)源性Nek2C表達低的細胞系MCF10A和MCF10AT。PCR和westernbl

7、ot分別檢測其mRNA和蛋白質(zhì)表達水平，同時對其生長能力，浸潤及遷移進行檢測。選取不同階段的乳腺組織采用PCR技術(shù)檢測其Nek2C的mRNA表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.Nek2C質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的MCF10A和MCF10AT細胞分別采用westernblot和半定量PCR檢測Nek2C表達水平，結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，Nek2C質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的細胞其Nek2C的mRNA和蛋白水平均表達上調(diào)，而且細胞生長活躍。
　　2.合

8、成特異的siRNA寡核苷酸，采用RNA干擾技術(shù)沉默Nek2C表達高的細胞系MCF10DCIS.com和MCF10Cal，半定量PCR驗證顯示Nek2CmRNA表達缺失，與陰性對照組相比轉(zhuǎn)染后的細胞其生長、浸潤及遷移能力均明顯減弱，細胞的惡性程度降低。
　　3.在乳腺組織(正常乳腺組織、不典型增生乳腺組織、導(dǎo)管內(nèi)癌及浸潤性癌)中驗證Nek2C的mRNA表達水平，PCR結(jié)果顯示導(dǎo)管內(nèi)癌和浸潤性癌中的Nek2C表達水平明顯高于正常組織和

9、不典型增生。在浸潤性癌組織中，高分級的癌組織中Nek2C高于低分級的癌組織。
　　結(jié)論:
　　1.在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中(正常乳腺上皮細胞→導(dǎo)管上皮不典型增生→導(dǎo)管原位癌→浸潤性癌)Nek2C的表達水平表現(xiàn)為逐步增加的趨勢，提示Nek2C可能參與了乳腺組織的惡性轉(zhuǎn)化。
　　2.Nek2C在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用，在細胞水平，上調(diào)內(nèi)源性Nek2C表達水平低的細胞系中的Nek2C水平，其細胞惡性程度增強，下調(diào)