乳腺浸潤性微乳頭狀癌病理學(xué)特征的相關(guān)研究.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分 乳腺浸潤性微乳頭狀癌的病理學(xué)特征與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 [目的]：研究乳腺浸潤性微乳頭狀癌(Invasive micropapillary carcinoma，IMPC)的病理組織學(xué)分級、淋巴管密度、間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤等病理學(xué)特征及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 [方法]：本實(shí)驗(yàn)部分觀察51例乳腺IMPC的主要病理學(xué)特征及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，采用免疫組織化學(xué)方法檢測IMPC中VEGF-C及其受體VEG

2、FR-3的表達(dá)情況，并計(jì)數(shù)淋巴管密度，分析這些因素與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 [結(jié)果]： 1．乳腺IMPC病理組織學(xué)分級Ⅱ/Ⅲ級組的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)平均12.5個，明顯高于Ⅰ級組的 4.0 個(P<0.05)，但二者間的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率無顯著性差異(P=0.340)： 2．間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤(+)/(++)組的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率(96.4％)明顯高于(-)/(±)組(60.9％)(P<0.01)，且其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)平均14.4個，也明顯

3、高于(-)/(±)組的4.6個(P<0.01)； 3．VEGF-C 的表達(dá)與病理組織學(xué)分級呈正相關(guān)(P<0.01)，組織學(xué)分級Ⅱ級和Ⅲ級組 VEGF-C的表達(dá)均顯著高于Ⅰ級組(分別為P<0.05，P<0.01)；VEGF-C的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也呈正相關(guān)(P<0.05)；淋巴管密度與 VEGF-C 表達(dá)(P<0.01)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.01)呈正相關(guān)； 4．腫瘤大小與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著性關(guān)系(P>0.05)； 5

4、．腫瘤組織中IMPC成分的多少與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著性關(guān)系(P=0.932)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶為純IMPC或以IMPC成分為主： 6．28例伴有導(dǎo)管原位癌的IMPC中，14例為微乳頭狀型導(dǎo)管原位癌(14/28例，50％)，細(xì)胞分化較差。 [結(jié)論]： 1．乳腺IMPC的病理組織學(xué)分級、淋巴管密度及間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤可能是影響IMPC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵性因素。 2．VEGF-C及其受體 VEGFR-3 表達(dá)增高是促使IM

5、PC發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要原因。 3．IMPC 的生物學(xué)行為并不取決于腫瘤的大小及腫瘤中IMPC成分的多少，而可能與IMPC成分本身的性質(zhì)，如腫瘤細(xì)胞的異型性、間質(zhì)反應(yīng)等因素有關(guān)。 4．分化較差的微乳頭狀型導(dǎo)管原位癌可能是IMPC的早期階段。 第二部分 乳腺浸潤性微乳頭狀癌微環(huán)境中浸潤的淋巴細(xì)胞的意義 [目的]：對乳腺浸潤性微乳頭狀癌(Invasive micropapillary carcinoma，IM

6、PC)腫瘤微環(huán)境中浸潤的淋巴細(xì)胞的意義進(jìn)行深入研究。通過對伴較多淋巴細(xì)胞浸潤的IMPC 與乳腺髓樣癌(Medullary carcinoma，MC)和不典型髓樣癌(Atypicalmedullary carcinoma，AMC)(三種腫瘤組織均為腫瘤細(xì)胞異型性較高、間質(zhì)內(nèi)有大量淋巴細(xì)胞浸潤)中浸潤的淋巴細(xì)胞進(jìn)行對比研究，初步探討不同類型乳腺癌微環(huán)境中淋巴細(xì)胞浸潤的意義及其相關(guān)分子機(jī)制，尋求有些腫瘤中(如IMPC)間質(zhì)內(nèi)雖有大量淋巴細(xì)胞浸

7、潤，但預(yù)后差的原因。 [方法]： 1．顯微鏡觀察和選取乳腺伴較多淋巴細(xì)胞浸潤的IMPC28 例、乳腺 MC29例和乳腺AMC35例，HE染色下觀察三種腫瘤組織中腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(Tumorinfiltrating lymphocytes，TILs)的分布； 2．采用免疫組織化學(xué)染色(S-P法)，檢測三種腫瘤組織中CD3、CD4、CD8、CD20和CD56的表達(dá)，分析三種腫瘤中TILs的種類和分布特點(diǎn)；并檢測三種腫

8、瘤組織中Fas和FasL的表達(dá)； 3．對三種腫瘤組織中腫瘤細(xì)胞呈 Fas和/或FasL 陽性的病例，進(jìn)一步分別作Fas、FasL與T淋巴細(xì)胞標(biāo)記物(CD4、CD8)的雙重免疫組化染色，以確定通過Fas/FrasL途徑與腫瘤細(xì)胞相互作用的T淋巴細(xì)胞的類型和分布； 4．對三種腫瘤組織中具有CD8<'+>T淋巴細(xì)胞(細(xì)胞毒T細(xì)胞，cytotoxic Tlymphocyte，CTL)的病例，分別進(jìn)行CD8與穿孔素(Perfori

9、n)、粒酶B(GranzymeB)、Fas及FasL 的雙重免疫熒光染色，并通過激光掃描共聚焦顯微鏡(Laserscanning confocal microscope，LSCM)觀察和分析呈現(xiàn)不同細(xì)胞毒活性狀態(tài)的CD8<'+>T淋巴細(xì)胞的分布和所占比例。 [結(jié)果]： 1.HE 染色下，三種腫瘤組織中 THLs 的分布有所不同。伴較多淋巴細(xì)胞浸潤的IMPC中，TILs 以間質(zhì)浸潤淋巴細(xì)胞(stromal 組)為主，即淋巴

10、細(xì)胞多位于癌巢外圍和腫瘤組織的邊緣，而每個由微小乳頭構(gòu)成的癌細(xì)胞巢之間很少或幾乎無淋巴細(xì)胞浸潤：MC和AMC中，TILs以癌巢間浸潤淋巴細(xì)胞(intraepithelial組)為主，呈片塊狀排列的癌細(xì)胞巢之間可見大量淋巴細(xì)胞浸潤，部分病例的癌巢外圍和腫瘤組織邊緣也可見淋巴細(xì)胞浸潤。 2.三種腫瘤組織中，CD3<'+>T淋巴細(xì)胞的陽性程度均顯著高于 CD20<'+>B淋巴細(xì)胞(均為P<0.01)；CD8<'+>T淋巴細(xì)胞的陽性程度

11、均顯著高于CD4<'+>T淋巴細(xì)胞(均為P<0.01)。僅2例MC、1例AMC和1例IMPC中見少數(shù)CD56<'+>的NK細(xì)胞浸潤。 3.MC和AMC中，腫瘤細(xì)胞Fas的表達(dá)、淋巴細(xì)胞FasL的表達(dá)均顯著高于IMPC(均為P<0.01)，免疫組化雙染色表明這些淋巴細(xì)胞主要是CD8<'+>T細(xì)胞，且多位于癌細(xì)胞巢之間；而IMPC中，腫瘤細(xì)胞FasL 的表達(dá)、淋巴細(xì)胞Fas的表達(dá)均高于 MC 和 AMC，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.0

12、5)，雙染色表明其淋巴細(xì)胞也以CD8<'+>T細(xì)胞為主，且多為間質(zhì)浸潤淋巴細(xì)胞。 4.雙重免疫熒光染色，LSCM 觀察和分析表明：與IMPC相比較，MC和AMC 中標(biāo)記 CD8<'+>T 淋巴細(xì)胞的綠色熒光面積較大；且MC 和 AMC中，Perforin<'+>CD8<'+>、Granzyme B<'+>CD8<'+>和FasL<'+>CD8<'+>淋巴細(xì)胞在CD8<'+>T細(xì)胞中所占的比例及 Perforin<'+>CD8<'

13、+>/Granzyme B<'+>CD8<'+>淋巴細(xì)胞的重疊率均顯著高于IMPC(均P<0.05)，且這些淋巴細(xì)胞多位于癌細(xì)胞巢之間；IMPC 中 Fas<'+>CD8<'+>淋巴細(xì)胞在CD8<'+>T細(xì)胞中所占的比例高于MC和AMC，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)，這些 Fas<'+>CD8<'+>淋巴細(xì)胞多為間質(zhì)浸潤淋巴細(xì)胞。 [結(jié)論]： 1.乳腺伴較多淋巴細(xì)胞浸潤的IMPC、MC和AMC三種腫瘤微環(huán)境中均有T、

14、B淋巴細(xì)胞浸潤，但主要為T淋巴細(xì)胞，而這些T淋巴細(xì)胞中又以CD8<'+>細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)為主。三種腫瘤組織中，幾乎不見NK細(xì)胞浸潤。 2．三種腫瘤組織中 TILs的分布不同：伴較多淋巴細(xì)胞浸潤的IMPC中，TILs以間質(zhì)浸潤淋巴細(xì)胞(stromal組)為主：而MC 和 AMC中，TILs以癌巢間浸潤淋巴細(xì)胞(intraepithelial組)為主，更有利于淋巴細(xì)胞充分發(fā)揮其抗腫瘤效應(yīng)。 3．在MC和AMC中，腫瘤細(xì)

15、胞周圍大量CD8<'+>的CTL，浸潤，它們分泌Perforin和Granzyme B溶解腫瘤細(xì)胞；但CTL的這種細(xì)胞毒作用在IMPC中很弱，這可能是IMPC中雖有較多淋巴細(xì)胞浸潤但預(yù)后差的一個重要原因。 4．MC 和 AMC 中，呈Fas高表達(dá)的癌細(xì)胞巢之間，大量FasL<'+>的 CTL 浸潤，可通過 Fas/FasL 途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；而IMPC中，F(xiàn)asL<'+>的CTL少，且多位于癌巢外圍和腫瘤組織的邊緣，腫瘤細(xì)

16、胞Fas的表達(dá)又低，這些均不利于CTL通過Fas/FasL途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，這可能是IMPC中雖有較多淋巴細(xì)胞浸潤但預(yù)后差的另一個重要原因。 5．在IMPC 中，腫瘤細(xì)胞可能下調(diào)Fas表達(dá)來逃避免疫攻擊，但同時(shí)增加FasL 的表達(dá)，誘導(dǎo)Fas<'+>的淋巴細(xì)胞凋亡，進(jìn)行反向攻擊。這可能也是IMPC中雖有較多淋巴細(xì)胞浸潤但預(yù)后差的一個重要原因。 6．與MC和AMC相比較，IMPC 微環(huán)境中的TILs具有不同的功能和活化