新型選擇性腫瘤壞死因子-α轉化酶抑制劑的HPLC篩選方法的研究.pdf

1、腫瘤壞死因子-α轉化酶(TACE或ADAM17)屬于含鋅金屬蛋白酶家族。目前大量的實驗研究發(fā)現(xiàn)，TACE具有重要的生理和病理作用，其功能涉及到調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、誘發(fā)炎癥性腸病以及神經(jīng)性疾病等。TACE能催化水解人體內(nèi)的跨膜型腫瘤壞死因子-α(pro-TNF-α)轉化為可溶性的sTNF-α；誘發(fā)炎癥性疾病。因此，TACE成為治療炎癥性疾病的新靶標。 人工合成的小分子抑制劑通過抑制TACE活性，進而控制炎癥時人體內(nèi)過高的sTNF-α水平

2、，因此，尋找這些小分子抑制劑變的尤為重要，而建立有效評價酶抑制劑活性的方法是篩選這些小分子抑制劑的關鍵。本文就致力于建立評價TACE抑制劑的活性的方法。具體研究內(nèi)容如下： 1.采用HPLC法評價TACE抑制劑活性。依據(jù)底物(12肽)的結構，合成了一種新化合物：DL-α-氨基丙酸- Dpa，作為定量分析的內(nèi)標物。對酶濃度、TACE酶促反應時間、流動相等實驗條件進行了優(yōu)化，獲得最佳測試條件，建立了使用內(nèi)標法定量測定TACE活性的HP

3、LC法；其線性范圍為10～400μmol/L，檢出限(LOD)為0.1μmol/L。然后，在最佳實驗條件下，用此法測定抑制劑GM6001抑制TACE的半數(shù)抑制濃度IC50值。最后，用此新方法測定標準樣品，其日內(nèi)和日間的RSD都分別小于5％和10％；回收率在85％～115％間。 2.HPLC法評價MMPs抑制劑活性。為了滿足選擇性TACE抑制劑篩選的需要，還必須要建立評價MMPs抑制劑的方法。本實驗以MMP-9作為MMPs家族的代