宮內(nèi)暴露鄰苯二甲酸二環(huán)己酯對(duì)胎兒型睪丸間質(zhì)細(xì)胞的作用.pdf

1、睪丸間質(zhì)細(xì)胞作為雄性體內(nèi)最主要的雄激素來(lái)源，其發(fā)育過(guò)程及功能受到了各種環(huán)境因素的影響。鄰苯二甲酸二環(huán)已酯(DCHP)是塑化劑的一種，廣泛應(yīng)用于橡膠，樹(shù)脂，聚合物，包括硝酸纖維素，聚醋酸乙烯酯和聚氯乙烯，增加其穩(wěn)定性。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?研究塑化劑鄰苯二甲酸二環(huán)已酯(DCHP)對(duì)大鼠胎兒型睪丸間質(zhì)細(xì)胞的分布、功能以及睪丸的發(fā)育的影響以及其機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法:購(gòu)買(mǎi)成年雄性大鼠和雌性大鼠，待其交配成功后記為母鼠懷孕第1天，從母鼠懷孕

2、第12天到21天內(nèi)分別用玉米油（作為對(duì)照）和DCHP(10、100、500和1000 mg/kg)進(jìn)行灌胃。1）系統(tǒng)毒性，母鼠懷孕至21.5天仔鼠出生，稱(chēng)量雄性仔鼠的體重研究其對(duì)雄性仔鼠的系統(tǒng)毒性，計(jì)算雄性及雌性仔鼠的出生率比，研究DCHP對(duì)雄/雌性仔鼠的出生比值的影響;測(cè)量雄性仔鼠肛門(mén)生殖器距離(AGD)，統(tǒng)計(jì)其生殖系統(tǒng)發(fā)育障礙的比率;2）用RIA對(duì)新生雄性仔鼠睪丸睪酮激素進(jìn)行測(cè)量;3）免疫組化著色結(jié)蛋白對(duì)局部睪丸功能障礙的頻率進(jìn)行統(tǒng)

3、計(jì);4）HE染色(HE)及多核生殖母細(xì)胞（MNGs）研究DCHP對(duì)多核生殖母細(xì)胞的影響;5)3β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶(HSD3B1)酶染胎兒型睪丸間質(zhì)細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)胎兒型睪丸間質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量、聚集和分布情況;6）HSD3B1免疫組織化學(xué)染色標(biāo)記的胎兒睪丸間質(zhì)細(xì)胞，測(cè)量胎兒型睪丸間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核大小、細(xì)胞質(zhì)大小、核/質(zhì)進(jìn)行比較;7）應(yīng)用Q-PCR技術(shù)對(duì)睪酮生成相關(guān)基因如黃體生成素受體(Lhcgr)，膽固醇運(yùn)送基因包括膽固醇LDL受體(Scarb1

4、)和類(lèi)固醇合成急性調(diào)節(jié)蛋白(Star)，類(lèi)固醇合成酶的基因包括膽固醇側(cè)鏈裂解酶CYP11A1(Cyp11a1)、HSD3B1(Hsd3b1)、P450-17α羥化酶P450C17(Cyp17a1)和17β羥基類(lèi)固醇脫氫酶Ⅲ型HSD17B3(Hsd17b3)以及胰島素樣3因子INSL3(Insl3)等相關(guān)基因的表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定;8）應(yīng)用半定量免疫組織化學(xué)染色對(duì)睪丸間質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白CYP11A1、HSD3B1和INSL3等蛋白水平的表達(dá)量

5、進(jìn)行測(cè)定;9）應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件GraphPad對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，值表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，且數(shù)據(jù)用單因素方差分析進(jìn)行分析。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1）不同劑量的DCHP未影響仔鼠的出生率，每個(gè)母鼠生產(chǎn)的仔鼠的數(shù)目以及雄/雌出生率的比值不變，但雄性仔鼠的體重在DCHP劑量≥10mg/kg組已表現(xiàn)出明顯下降;2）睪丸睪酮水平隨DCHP劑量的增加呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，并且在DCHP劑量為500和1000mg/kg時(shí)出現(xiàn)顯著差異;3）DCHP劑量依賴(lài)性地增

6、加多核生殖母細(xì)胞(MNGs)和局部睪丸功能障礙的頻率，并觀察到最低有害作用劑量(LOAEL)為100 mg/kg，而1000mg/kg DCHP組MNGs出現(xiàn)率高達(dá)5/6;4）DCHP呈劑量依賴(lài)性地增加胎兒型睪丸間質(zhì)細(xì)胞聚集，LOAEL10 mg/kg即可減小胎兒型睪丸間質(zhì)細(xì)胞、胞漿及細(xì)胞核大小。但是，每個(gè)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的總數(shù)目未見(jiàn)明顯差異;5）DCHP劑量依賴(lài)性地抑制HSD3B1的表達(dá)，最低抑制有效濃度為10mg/kg，DCHP劑量達(dá)5