鄰苯二甲酸二乙基己基酯對大鼠肺損傷的影響.pdf

1、目的：1．觀察鄰苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)對大鼠肺泡巨噬細胞的形態(tài)與功能的影響，探討DEHP對大鼠肺損傷的機制：
　　 2．進一步探討DEHP與肺纖維化的關(guān)系。
　　 方法：1．實驗動物與分組自然受孕的雌性SD大鼠(體重220-280g)24只分成四組：正常對照組(n=6)、低劑量組(n=6)、中劑量組(n=6)、高劑量組(n=6)。受孕后第1天開始每天給母鼠灌胃，自然分娩后繼續(xù)灌胃直至子鼠出生后21d獲取所需的子

2、鼠標本，子鼠均由母鼠哺乳喂養(yǎng)，并經(jīng)母鼠灌胃染毒。對照組給予玉米油0.5ml/d，后三組每天一次給予玉米油和DEHP混合物0.5m1灌胃染毒。DEHP的染毒量為低劑量組(DEHP10mg/kg/d)、中劑量組(DEHP100mg/kg/d)和高劑量組(DEHP750mg/kg/d)。在生后第21天，每組隨機取10只子鼠，獲肺泡巨噬細胞(AM)，以及肺組織標本。
　　 2．檢測指標記錄母鼠體重和生后第21天子鼠體重。在生后21天給子

3、鼠股動脈放血處死子鼠，采用支氣管肺泡灌洗，用含10％小牛血清的RPMI-1640細胞培養(yǎng)液貼壁分離和培養(yǎng)肺泡巨噬細胞(AMΦ)2h。測定巨噬細胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量，一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量，以及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性。然后取右肺中葉，常規(guī)蘇木素伊紅(HE)染色、Masson三色染色法，觀察不同劑量DEHP染毒的子鼠光鏡下肺組織的形態(tài)學(xué)改變，透射電鏡觀察肺超微結(jié)構(gòu)變化。

4、免疫組化法(IHC)檢測肺組織骨橋蛋白(OPN)的表達，取新鮮肺組織用RT-PCR檢測OPN基因的表達情況。
　　 結(jié)果：1．體重中、高劑量組子鼠體重明顯下降，分別與正常對照組和低劑量組比較有顯著差異(P＜0.01)。中、高劑量實驗組之間兩兩比較也有顯著性差異(P＜0.05)，劑量越大，體重下降越明顯。
　　 2.肺泡巨噬細胞內(nèi)生化指標低劑量組子鼠肺組織GSH-PX、SOD活性稍低于正常對照組，MDA含量、總NOS以及N

5、O活性稍高于正常對照組，但兩者無統(tǒng)計學(xué)意義。中劑量組和高劑量組子鼠肺組織GSH-PX、SOD活性明顯低于正常對照(P＜0.05，P＜0.01)。中劑量組和高劑量組MDA含量、總NOS以及NO活性高于正常組(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 3．肺形態(tài)學(xué)分析HE染色低劑量組和中劑量組與正常對照組比較變化不大，但在高劑量組子鼠顯示肺間質(zhì)增厚、肺間質(zhì)細胞增多，肺泡數(shù)目減少。Masson三色染色顯示，正常對照組子鼠僅肺內(nèi)血管壁可見少

6、量被染成藍色的膠原纖維，低劑量組子鼠肺細小動脈以及肺間質(zhì)均見有藍色的膠原纖維沉積，中劑量組和高劑量藍色膠原纖維沉積更為顯著。
　　 4．肺電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察正常對照組、低劑量組未見明顯病理改變。中劑量和高劑量組子鼠肺組織出現(xiàn)一些病理性變化：肺泡Ⅱ型上皮細胞核固縮，微絨毛較少，板層小體增多，間質(zhì)膠原纖維增生。高劑量組核固縮，細胞染色質(zhì)邊聚，可見板層小體空化，線粒體變圓、空泡化，肺間質(zhì)見膠原纖維斷裂。
　　 5．肺組織OPN蛋

7、白的表達正常對照組子鼠肺組織OPN表達主要見于支氣管、肺泡上皮細胞內(nèi)；低劑量組子鼠肺細小動脈內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞以及周圍巨噬細胞均見有OPN的表達，中劑量組和高劑量表達更強(P＜0.05)。
　　 6．肺組織OPN的mRNA表達水平中劑量和高劑量組子鼠肺組織OPNmRNA表達升高(P＜0.05)，低劑量組OPNmRNA表達也有升高趨勢，但統(tǒng)計學(xué)無顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1．中、高劑量DEHP母鼠染毒可激