鄰苯二甲酸二乙基己酯誘導(dǎo)的過氧化損傷對認(rèn)知相關(guān)蛋白的影響.pdf

1、鄰苯二甲酸二乙基己酯（diethylhexylphthalate，DEHP）是目前使用最為廣泛，年產(chǎn)量最大的一種塑化劑。研究表明，DEHP能通過吞咽、呼吸和皮膚直接接觸等方式進(jìn)入人體和動物體內(nèi)，并可對生殖系統(tǒng)、血液、腎臟、肝臟等造成損害。此外，DEHP對神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能的影響也有研究，一項針對學(xué)齡兒童的調(diào)查研究表明，兒童尿液中鄰苯二甲酸酯代謝物含量與其智力的水平呈負(fù)相關(guān);但是DEHP影響神經(jīng)系統(tǒng)認(rèn)知功能的具體機(jī)制并不清楚。本文以小鼠

2、的神經(jīng)瘤細(xì)胞為研究對象，在細(xì)胞水平上探究了DEHP誘導(dǎo)的過氧化損傷對微管相關(guān)蛋白tau、蛋白激酶A(ProteinkinaseA，PKA)、環(huán)腺苷酸反應(yīng)原件結(jié)合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein，CREB)等認(rèn)知功能相關(guān)蛋白水平和功能的影響，以期為DEHP對學(xué)習(xí)認(rèn)知功能影響的機(jī)制性研究提供一些借鑒和參考。
　　本實驗中，我們用500μMDEHP處理小鼠的神經(jīng)瘤細(xì)胞(N2a)24小時，或者用維生

3、素E(VitaminE，VitE)(25、50μM)預(yù)處理細(xì)胞1小時后，再用DEHP(500μM)處理細(xì)胞24小時，然后檢測細(xì)胞裂解液中丙二醛(MaleicDialdehyde，MDA)、和活性氧自由基（Reactiveoxidespecies，ROS）的含量以及超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)的活性等指標(biāo)以判斷DEHP對細(xì)胞的過氧化損傷以及VitE對DEHP誘導(dǎo)的過氧化損傷的阻止作用;用高倍相差顯微鏡觀

4、察DEHP對細(xì)胞形態(tài)的影響;利用免疫印跡方法檢測上述處理對微管相關(guān)蛋白tau磷酸化修飾和tau蛋白微管結(jié)合功能的影響，以及GSK-3β活性的變化;此外，還通過免疫印跡的方法檢測了Synapsin-1和PSD95含量以及PKA和CREB活性的改變。結(jié)果表明:(1)隨著DEHP濃度的增加，胞內(nèi)MDA、ROS含量呈劑量依賴性上升的趨勢;而SOD活性呈劑量依賴性下降的趨勢。與對照組相比，500μMDEHP處理細(xì)胞將導(dǎo)致明顯的過氧化損傷(P＜0.

5、05)。而VitE能夠阻止DEHP對細(xì)胞的過氧化損傷作用。(2)與對照組相比，DEHP處理后，細(xì)胞突起長度縮短，數(shù)量減少。(3)與對照組相比，DEHP處理組GSK-3β的總量不變，GSK-3β在Ser9位點(diǎn)的磷酸化程度下降(P＜0.01);tau蛋白總量不變，tau-Thr231位點(diǎn)(P＜0.01)和tau-Ser262(P＜0.05)位點(diǎn)的磷酸化程度增加;經(jīng)高速離心后，上清中tau蛋白(游離的tau)比例增加(P＜0.05)，沉淀中t

6、au蛋白(與微管結(jié)合的tau)比例減少(P＜0.05)。(4)與對照組相比，DEHP處理后，突觸結(jié)構(gòu)中兩大標(biāo)志性蛋白Synapsin-1(P＜0.01)和PSD95(P＜0.01)的含量降低。(5)與對照組相比，DEHP處理組CREB的總量不變，CREB在Ser133位點(diǎn)的磷酸化程度下降(P＜0.05)，CREB的上游激酶PKA的調(diào)節(jié)亞單位含量上升(P＜0.05)，催化亞單位含量下降(P＜0.01)。(6)VitE預(yù)處理能夠阻止DEHP