HER-2、EZH2表達(dá)與直腸癌預(yù)后的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分 HER-2表達(dá)與直腸癌預(yù)后的關(guān)系
　　研究背景:
　　直腸癌在世界范圍內(nèi)屬于高發(fā)腫瘤，是常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一。病理分期是直腸癌主要預(yù)后因素，但是相同病理分期的患者預(yù)后也有差異。因此，如果能有一個(gè)生物標(biāo)志物預(yù)測(cè)直腸癌的生存并指導(dǎo)患者進(jìn)一步治療，將非常有意義。HER-2蛋白在乳腺癌中良好的預(yù)測(cè)作用及分子靶向藥曲妥珠單抗成功的應(yīng)用，使得腫瘤學(xué)家們探索HER-2在其他腫瘤中的作用。直腸癌HER-2陽(yáng)性率及其與預(yù)后的關(guān)

2、系仍然存在爭(zhēng)議。因此我們進(jìn)行多個(gè)腫瘤中心的大樣本研究，以確定HER-2對(duì)直接進(jìn)行手術(shù)直腸癌患者的預(yù)測(cè)作用。
　　方法:
　　回顧性分析2007年1月至2009年12月直腸癌患者。TNM分期根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。入組標(biāo)準(zhǔn):結(jié)直腸鏡確診為直腸腺癌;術(shù)前完善檢查:查體、血細(xì)胞分析、肝功能、腎功能、胸部X線或CT檢查、腹部和盆腔強(qiáng)化CT或MRI檢查;無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，患者直接進(jìn)行手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn):診斷時(shí)已存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)

3、移;診斷時(shí)同時(shí)存在其他部位的惡性腫瘤;既往曾患其他惡性腫瘤;沒(méi)有隨訪資料。根據(jù)術(shù)前檢查記錄獲得年齡、性別、距肛緣距離等資料。腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況由病理資料獲得。疾病復(fù)發(fā)及生存數(shù)據(jù)由隨訪資料獲取。
　　免疫組織化學(xué)方法評(píng)估腫瘤細(xì)胞HER-2的表達(dá)。根據(jù)兩項(xiàng)參數(shù)評(píng)估HER-2狀態(tài):染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例。具體為:0，無(wú)著色(IHC0);1+，10％以上的細(xì)胞較弱的著色(IHC1+);2+，10％以上的細(xì)胞中度著色(IHC2+

4、);3+，10％以上的細(xì)胞較強(qiáng)著色(IHC3+)。所有經(jīng)免疫組化檢查評(píng)估為HER-22+患者均需行熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)檢測(cè)。計(jì)數(shù)60個(gè)腫瘤細(xì)胞，若HER-2/CEP17≥2.0為HER-2擴(kuò)增。
　　所有患者均接受術(shù)后標(biāo)準(zhǔn)隨訪:2年之內(nèi)每3月檢查一次，其后每半年檢查一次。檢查內(nèi)容包括:查體、肝功能、腎功能、血細(xì)胞分析、大便常規(guī)、胸部X線片或胸部CT、腹部和盆

5、腔強(qiáng)化CT或MRI檢查。手術(shù)后1年行結(jié)腸鏡檢查1次，以后每2-3年檢查一次。對(duì)于生存分析，無(wú)疾病生存定義為從手術(shù)之日起至局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生時(shí)間?？偵娑x為從手術(shù)之日起至死亡，或最后一次隨訪時(shí)間。
　　統(tǒng)計(jì)分析均采用SPSS17.0軟件進(jìn)行。HER-2的表達(dá)與臨床病例特點(diǎn)（包括年齡、性別、距肛緣的距離、分期等）的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn);臨床病例特點(diǎn)(包括HER-2)與局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn)。單因素生存分析采用Kap

6、lan-Meier方法，多因素生存分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型。p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　1.患者臨床病理結(jié)果:共有717例患者入組，其中401例患者接受術(shù)后輔助治療。根據(jù)術(shù)后病理結(jié)果:193例評(píng)估為病理T1-2，524例評(píng)估為病理T3-4。377例沒(méi)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，340例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。
　　2.HER-2表達(dá)與臨床病理特點(diǎn)之間的關(guān)系:717例患者中201例評(píng)估為IHC0，193例評(píng)估為IH

7、C1+;224例評(píng)估為IHC2+;99例評(píng)估為IHC3+。FISH基因檢測(cè)顯示224例IHC2+的患者中有16例基因擴(kuò)增。在本研究中，99例IHC3+和16例IHC2+且有基因擴(kuò)增的患者評(píng)估為HER-2陽(yáng)性。717例直腸癌患者HER-2陽(yáng)性率16％。 HER-2的表達(dá)與性別、年齡、分化程度、T分期和N分期均不相關(guān)。
　　3.HER-2與腫瘤復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系。本研究中128例患者(17.8％)發(fā)生局部復(fù)發(fā)，206例患者(28.7

8、％)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。未發(fā)現(xiàn)年齡、性別、分化程度或距肛緣距離與局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。腫瘤浸潤(rùn)深度(pT)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(pN)狀態(tài)與局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(p＜0.001)。115例HER-2陽(yáng)性患者有26例發(fā)生局部復(fù)發(fā)，而602例HER-2陰性患者102例局部復(fù)發(fā)，無(wú)顯著性差異(p=0.146)。與HER-2陰性患者相比，HER-2陽(yáng)性患者更可能發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(36.5％ vs64.2％，p=0.007)。
　　4.單因素和多因素

9、分析均顯示腫瘤浸潤(rùn)深度(pT)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(pN)狀態(tài)是5年DFS和5年OS的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。115例HER-2陽(yáng)性患者5年無(wú)疾病生存率顯著低于602例HER-2陰性患者(52.2％ vs69.6％，p＜0.001)。HER-2陰性患者的5年總生存明顯優(yōu)于HER-2陽(yáng)性患者(73.9％ vs63.5％，p=0.013)。在亞組分析中，早期直腸癌(T1或T2且沒(méi)有淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移)HER-2過(guò)表達(dá)也是5年DFS(p=0.047)和5年OS的

10、不良預(yù)后因素(p=0.032)。在多因素分析中，HER-2是5年DFS(HR=1.929,95％ CI1.425-2.613, p＜0.001)和5年OS(HR=1.625;95％ CI1.155-2.285，p=0.005)的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)論:
　　該研究717例直腸癌患者中115例HER-2陽(yáng)性，陽(yáng)性率16％。HER-2能夠預(yù)測(cè)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，但不能預(yù)測(cè)局部復(fù)發(fā)。單因素和多因素均顯示HER-2是獨(dú)立不良預(yù)后因素。

11、>　　第二部分新輔助放化療直腸癌患者EZH2表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性研究
　　研究背景:
　　直腸癌是常見(jiàn)消化系統(tǒng)惡性腫瘤，死亡率和發(fā)病率均居癌癥死亡前列。局部進(jìn)展期直腸癌的標(biāo)準(zhǔn)治療是新輔助放化療后行全直腸系膜(total mesorectalexcision，TME)手術(shù)。但是不同患者對(duì)新輔助放化療的敏感性不同。因此，如果一種生物學(xué)標(biāo)志物能夠預(yù)測(cè)放化療的反應(yīng)，使不敏感患者避免過(guò)度治療，盡早進(jìn)行手術(shù)治療，這將帶來(lái)很多臨床獲益。實(shí)體

12、腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)EZH2的異常與腫瘤的侵襲性和/或患者的預(yù)后密切相關(guān)。然而，只有很少的文獻(xiàn)關(guān)注EZH2在直腸癌中的預(yù)測(cè)作用。本研究檢測(cè)治療前活檢標(biāo)本EZH2的表達(dá)，進(jìn)而研究EZH2對(duì)局部進(jìn)展期直腸癌放化療敏感性和生存期的預(yù)測(cè)作用。
　　材料和方法:
　　本研究為回顧性分析山東省腫瘤醫(yī)院直腸腺癌患者。完善檢查后根據(jù)美國(guó)聯(lián)合癌癥委員會(huì)(American Joint Committee on Cancer，AJCC)分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TN

13、M分期，T3和T4且無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者入組。
　　112例患者接受術(shù)前同步放化療后進(jìn)行手術(shù)的綜合治療。術(shù)前放療單次劑量為1.8Gy，每周5次，總量50.4Gy。同時(shí)進(jìn)行全身化療共2個(gè)周期，分別在放療開(kāi)始后的第1～5天和22～26天進(jìn)行。同步化療方案包括氟尿嘧啶±奧沙利鉑或卡培他濱±奧沙利鉑。放化療結(jié)束4-6周行全直腸系膜切除術(shù)。
　　病理檢查由兩位病理科醫(yī)師進(jìn)行。根據(jù)手術(shù)切除標(biāo)本的病理結(jié)果來(lái)評(píng)估腫瘤的降期。腫瘤反應(yīng)根據(jù)Dwora

14、k腫瘤退化分級(jí)(tumor regression grade，TRG)系統(tǒng)評(píng)估。
　　免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)EZH2、Ki-67的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　入組112名患者，62例評(píng)估為臨床T3期(cT3)，50例評(píng)估為臨床T4期(cT4)，38例評(píng)估為臨床N0期(cN0);74例評(píng)估為臨床N+期(cN+)。根據(jù)手術(shù)切除標(biāo)本病理結(jié)果，44例評(píng)估為病理T1-2(pT1-2)期，68例評(píng)估為病理T3-4(pT3-4)期;67評(píng)

15、估為病理N0(pN0)期，45例評(píng)估為病理N+(pN+）。對(duì)比治療前臨床分期和治療后病理分期結(jié)果，52.7％患者降期。根據(jù)病理腫瘤退縮分級(jí)評(píng)估47.3％(n=53)的患者反映良好(TRG3和TRG4)。
　　EZH2的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞增殖（Ki-67評(píng)估）顯著相關(guān)(p＜0.001)。EZH2低表達(dá)者對(duì)新輔助放化療更敏感:53例EZH2低表達(dá)者有30例達(dá)到好的腫瘤退縮反應(yīng);而59例EZH2高表達(dá)者只有21例達(dá)到好的腫瘤退縮反應(yīng)(p=0

16、.026)。53例EZH2低表達(dá)者有34例新輔助放化療后腫瘤降期;而59例EZH2高表達(dá)者只有25例新輔助放化療后腫瘤降期(p=0.021)。CEA正常和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也與好的腫瘤退縮反應(yīng)相關(guān)(p=0.033和p=0.046)。cT3患者比cT4患者更有可能達(dá)到好的腫瘤退縮反應(yīng)(p=0.01)。通過(guò)多因素逐步logistic回歸分析，我們發(fā)現(xiàn)EZH2低表達(dá)與好的腫瘤退縮（TRG3和TRG4）顯著相關(guān)(OR=2.684;95％ CI1.14

17、7-6.280，p=0.023)，與腫瘤降期顯著相關(guān)(OR=2.476;95％ CI1.107-5.537，p=0.027)。另外，cN也是腫瘤退縮反應(yīng)(p=0.018)和腫瘤降期的預(yù)測(cè)因子(p=0.025)。
　　112例患者中，59例高EZH2表達(dá)者的5年無(wú)病生存明顯差于EZH2高表達(dá)者(p=0.025)。單因素生存分析顯示EZH2低表達(dá)者5年總生存明顯優(yōu)于EZH2高表達(dá)者(p=0.032)。多因素分析EZH2是5年無(wú)病生存的

18、預(yù)測(cè)因子(HR=2.287;95％ CI1.137-4.602，p=0.020)，但不是5年總生存的預(yù)測(cè)因子(HR=2.182;95％ CI0.940-5.364, p=0.069)。
　　結(jié)論:
　　該項(xiàng)研究中，我們首次發(fā)現(xiàn)EZH2能夠預(yù)測(cè)局部進(jìn)展期直腸癌對(duì)術(shù)前放化療的治療反應(yīng)。單因素生存分析發(fā)現(xiàn)，EZH2的高表達(dá)者5年無(wú)疾病生存率和5年總生存率更低，是局部進(jìn)展期結(jié)直腸癌不良預(yù)后因素。進(jìn)一步確定EZH2在直腸癌的預(yù)測(cè)作用，