亞致死劑量吡蟲啉對(duì)意大利蜜蜂中腸菌群的影響.pdf

1、蜜蜂是全球范圍內(nèi)數(shù)量最大的授粉昆蟲，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中扮演著重要角色，也是常用農(nóng)藥的非靶標(biāo)生物。殺蟲劑對(duì)蜜蜂的安全性評(píng)估，一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)問題。大量研究表明，蜜蜂腸道內(nèi)棲息著大量微生物，這些微生物具有提供營養(yǎng)、抵抗病原菌侵襲等多種功能，與蜂群健康密切相關(guān)。因而，本文以出房1-2h內(nèi)的意大利蜜蜂為研究對(duì)象，在實(shí)驗(yàn)室條件下，探究了亞致死劑量吡蟲啉對(duì)其中腸細(xì)菌群落的影響，以期為殺蟲劑的安全性評(píng)價(jià)體系提供理論依據(jù)。
　　在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)分別用三種

2、不同濃度的吡蟲啉蔗糖溶液(45 ppb，15 ppb，5 ppb)、含丙酮(0.03％)糖水空白對(duì)照飼喂出房1-2h內(nèi)的意大利蜜蜂，每個(gè)處理組三個(gè)重復(fù)，分別在飼喂3，6，9，12，15d時(shí)采集樣品。提取各組采集的蜜蜂樣品的中腸細(xì)菌基因組DNA，擴(kuò)增細(xì)菌16SrDNAV3區(qū)序列，對(duì)所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化和膠回收得到測序文庫，采用下一代高通量測序技術(shù)對(duì)中腸細(xì)菌群落進(jìn)行檢測分析。結(jié)果如下:
　　1.在IlluminaHiSeq2500測序

3、平臺(tái)上測得的60份樣品的16S rDNA V3區(qū)雙端測序結(jié)果經(jīng)過初步整理后，明確得到的序列為27，673，383條，每個(gè)樣本的平均序列數(shù)為461，223條（所測樣品的最小序列數(shù)為356，486條，最大序列數(shù)為529,077條）。
　　2.經(jīng)質(zhì)量控制后，我們將得到的15，102，475條16SrRNA高質(zhì)量序列，在QIIME平臺(tái)上分成不同的操作單元。通過與數(shù)據(jù)庫RDP、Greengene和SSU在內(nèi)的多個(gè)數(shù)據(jù)庫中的已知序列進(jìn)行比對(duì)，

4、獲得了每個(gè)樣品的菌群分類信息及其相對(duì)豐度信息。在門的生物分類學(xué)水平上，厚壁菌門(Firmicutes)和變形菌門(Proteobacteria)是主要菌屬。
　　3.為探究亞致死劑量吡蟲啉對(duì)蜜蜂中腸菌群組成是否存在劑量效應(yīng)，分別在處理3，6，9，12和15 d時(shí)收集樣品，分析相同時(shí)間點(diǎn)其主要腸道菌屬數(shù)量。通過T-檢驗(yàn)表明，同一時(shí)間內(nèi)各處理組間主要細(xì)菌數(shù)量差異不顯著(p＞0.05)。
　　4.為探究亞致死劑量吡蟲啉是否會(huì)影響蜜