不同輻照劑量對(duì)蜜蜂球囊菌的殺滅效果.pdf

1、養(yǎng)蜂業(yè)是我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的一個(gè)重要有機(jī)組成部分，但蜜蜂的生長(zhǎng)繁殖一直受到各種病原微生物特別是蜜蜂白堊病的危害。蜜蜂白堊病是由蜜蜂球囊菌感染而引起蜜蜂幼蟲(chóng)死亡的真菌性傳染病，20世紀(jì)90年代初開(kāi)始在我國(guó)暴發(fā)流行，以后時(shí)有發(fā)生，給我國(guó)的養(yǎng)蜂生產(chǎn)造成了嚴(yán)重危害。但非常遺憾的是，到目前為止,至今沒(méi)有有效的防控方法。研究發(fā)現(xiàn)，市售蜂花粉中常含有蜜蜂球囊菌，養(yǎng)蜂場(chǎng)在購(gòu)買(mǎi)此類(lèi)花粉作為蜜蜂飼料后，蜂群易患白堊病，通過(guò)60Co輻照殺滅蜂花粉中的蜜蜂球囊菌是切

2、斷白堊病傳播途徑的有效手段，而目前輻照劑量并不明確，導(dǎo)致輻照效果參差不齊。本研究以蜜蜂球囊菌為研究對(duì)象，探究不同輻照劑量對(duì)蜜蜂球囊菌的殺滅效果，以期明確有效殺滅蜜蜂球囊菌的最低輻照劑量，為60Co輻照蜜蜂飼料（特別是蜂花粉）時(shí)的輻照劑量選擇提供依據(jù)。
　　本研究利用細(xì)菌純化技術(shù)從患白堊病(Bee Chalkbrood Disease)的意大利蜜蜂幼蟲(chóng)體內(nèi)分離純化得到蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)，并結(jié)合形態(tài)學(xué)、乳酸

3、酚棉蘭染色以及5.8S rDNA序列分析技術(shù)進(jìn)行鑒定。同時(shí)制備不同梯度濃度的A.apis孢子懸液加入到幼蟲(chóng)飼料中，對(duì)3日齡意蜂幼蟲(chóng)體外接種試驗(yàn)，利用人工飼養(yǎng)蜜蜂幼蟲(chóng)技術(shù)，統(tǒng)計(jì)幼蟲(chóng)患病率，通過(guò)寇式法計(jì)算得出蜜蜂球囊菌對(duì)意大利蜜蜂幼蟲(chóng)的半數(shù)致死濃度，對(duì)添加半數(shù)致死濃度的孢子的飼料進(jìn)行不同劑量輻照處理并進(jìn)行侵染意大利蜜蜂幼蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)，最終確定對(duì)添加半數(shù)致死濃度的蜜蜂球囊菌孢子飼料的最低有效輻照劑量。
　　試驗(yàn)結(jié)果表明:從患白堊病的意大利蜜蜂

4、幼蟲(chóng)體內(nèi)分離純化得到蜜蜂球囊菌的菌落形態(tài)與文獻(xiàn)報(bào)道一致;顯微鏡下觀察其孢囊直徑，孢子球直徑和孢子的長(zhǎng)寬比等形態(tài)特征與文獻(xiàn)報(bào)道相同或接近;對(duì)分離純化的蜜蜂球囊菌進(jìn)行分子鑒定，擴(kuò)增片段大小符合理論值，經(jīng)與GenBank所公布的蜜蜂球囊菌特異性片段序列做blast對(duì)比，重合度99％;計(jì)算得出蜜蜂球囊菌對(duì)人工飼養(yǎng)條件下的意蜂幼蟲(chóng)的半數(shù)致死濃度為5.6×104個(gè)/ml;經(jīng)60Co對(duì)添加半數(shù)致死濃度的蜜蜂球囊菌孢子飼料進(jìn)行輻照后飼喂幼蟲(chóng)，在7.0k