LT-Y008的骨髓保護(hù)作用及其初步機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究LT-Y008連續(xù)腹腔注射給藥對(duì)環(huán)磷酰胺致大鼠骨髓損傷和輻射致小鼠骨髓損傷的保護(hù)作用，探討LT-Y008骨髓保護(hù)作用的初步機(jī)制，為L(zhǎng)T-Y008的進(jìn)一步研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。
　　 方法:1、LT-Y008對(duì)大鼠骨髓損傷的保護(hù)作用研究實(shí)驗(yàn):健康大鼠按體重隨機(jī)分為正常組，模型組，陽性組，LT-Y008低劑量組，中劑量組和高劑量組6組，每組20只（血液學(xué)指標(biāo)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)另設(shè)每組10只），雌雄各半，LT-Y008各劑量組按1

2、25μg/kg、250μg/kg、500μg/kg連續(xù)腹腔注射給藥5天，給藥后給予環(huán)磷酰胺(50mg/kg)造模3天。(1)末次給藥造模后d5，d10分別解剖1/2的大鼠，采血測(cè)定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白定量、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞平均容積、紅細(xì)胞平均血紅蛋白容量、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度、血小板計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)等血液學(xué)指標(biāo)以及血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶、總膽紅

3、素、尿素氮、肌酐、總蛋白、白蛋白、血糖、總膽固醇、甘油三脂、肌酸磷酸激酶，血清鈣、磷、鐵，血清鉀、鈉和氯等血液生化指標(biāo)，并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查及骨髓細(xì)胞計(jì)數(shù)分類;(2)血液學(xué)指標(biāo)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)分別在給藥造模前2天(d-2)，末次給藥造模后d1，d3，d5，d7，d10，d14，d17采血測(cè)定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白定量、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞平均容積、紅細(xì)胞平均血紅蛋白容量、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度、血小板計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核

4、細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)等血液學(xué)指標(biāo)。
　　 2、LT-Y008對(duì)小鼠骨髓損傷的保護(hù)作用研究實(shí)驗(yàn):健康小鼠按體重隨機(jī)分為正常組，模型組，陽性組，LT-Y008低劑量組，中劑量組和高劑量組6組，每組20只（血液學(xué)指標(biāo)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)和存活率實(shí)驗(yàn)另設(shè)每組10只動(dòng)物），雌雄各半，LT-Y008各劑量組按250μg/kg、500μg/kg、1000μg/kg連續(xù)腹腔給藥3天，接受6Gy或7Gy60 Co輻射(血液學(xué)指標(biāo)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)輻射劑量為6

5、Gy，存活率實(shí)驗(yàn)輻射劑量為7Gy)。(1)輻射造模后d3，d14分別解剖1/2的小鼠，取臟器并記錄重量，取骨髓涂片進(jìn)行骨髓細(xì)胞計(jì)數(shù)分類;(2)血液學(xué)指標(biāo)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)在輻射造模后d1，d3，d5，d7，d10，d14，d17采血測(cè)定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白定量、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞平均容積、紅細(xì)胞平均血紅蛋白容量、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度、血小板計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)等血液學(xué)指標(biāo);(3)存活率試驗(yàn)每天觀察

6、小鼠存活情況并記錄死亡時(shí)間。
　　 3、LT-Y008對(duì)骨髓損傷的保護(hù)作用初步機(jī)制研究:(1)檢測(cè)d5，d10大鼠血漿中MnSOD活性水平;(2) ELISA法檢測(cè)d3，d14小鼠血漿中TNFα和IL-1β含量。
　　 結(jié)果:1、LT-Y008對(duì)大鼠骨髓損傷的保護(hù)作用研究實(shí)驗(yàn):(1)陽性組雄性大鼠體重在d10后比正常組顯著降低，高劑量組雄性大鼠體重在d3后各時(shí)間點(diǎn)比正常組、模型組顯著降低，模型組雌性大鼠和高劑量組雌性大鼠

7、體重在d5后各時(shí)間點(diǎn)比正常組顯著降低;(2)陽性組和中劑量組大鼠的WBC、HGB、#MONO、％MONO、％NEUT、#LYMPH、％RETIC、RBC、PLT等指標(biāo)在d10，d14，d17比模型組明顯升高，或表現(xiàn)出升高趨勢(shì)，而高劑量組在MCH上對(duì)比模型組和陽性組有顯著性升高作用，顯示出一定骨髓保護(hù)作用，提示陽性藥和LT-Y008可能通過加快血細(xì)胞生成對(duì)抗環(huán)磷酰胺引起的骨髓損傷;(3) d5時(shí)，模型組TBIL與正常組有明顯升高，提示環(huán)磷

8、酰胺可能產(chǎn)生肝毒性，陽性組與LT-Y008各劑量組雄性大鼠的TBIL與模型組相比顯著降低，雌性大鼠的TBIL與模型組相比有降低趨勢(shì)，但變化并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;(4)環(huán)磷酰胺給藥導(dǎo)致大鼠胸腺重量降低，LT-Y008與陽性藥LTα對(duì)大鼠d5和d10的胸腺重量沒有明顯影響。環(huán)磷酰胺給藥導(dǎo)致大鼠脾臟d5時(shí)降低，d10升高，LT-Y008與陽性藥LTα對(duì)環(huán)磷酰胺的拮抗作用不明顯;(5)LT-Y008高劑量組與陽性組大鼠d5的骨髓細(xì)胞數(shù)較多和骨髓細(xì)胞形

9、態(tài)與正常組相似，d10的骨髓、脾臟組織結(jié)構(gòu)相對(duì)模型組均有顯著改善，。
　　 2、LT-Y008對(duì)小鼠骨髓損傷的保護(hù)作用研究實(shí)驗(yàn):(1)從d1開始，模型組小鼠體重較正常組顯著降低。陽性組和模型組動(dòng)物體重沒有明顯差異，各給藥劑量組也與模型組、陽性組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在d13后，各輻射組小鼠體重都顯示恢復(fù)趨勢(shì);陽性組、中劑量組和高劑量組小鼠在d14后尾部紅腫，提示可能產(chǎn)生較大的炎癥反應(yīng);(2) LT-Y008中劑量組、高劑量組和陽性組小鼠

10、的血液學(xué)指標(biāo)，如WBC、PLT、％NEUT、％MONO、％LYMPH、％RETIC等，在d13或d16與模型組相比顯著差異;(3)輻射后d3時(shí)，模型組、陽性組、LT-Y008各劑量組小鼠的胸腺、脾臟和肝臟重量比正常組顯著降低，低、中劑量組小鼠臟器重量與模型組相比有一定增加趨勢(shì);d14時(shí)LT-Y008中、高劑量組脾臟對(duì)比模型組有顯著增重;(4)骨髓細(xì)胞檢查結(jié)果顯示，模型組的骨髓細(xì)胞數(shù)量與正常組有明顯差異，LT-Y008低劑量組和陽性組小鼠

11、的骨髓細(xì)胞比模型組明顯增多，提示LT-Y008對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞有一定保護(hù)作用;(5)存活率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與模型組相比，LT-Y008中劑量組和陽性組小鼠的存活時(shí)間顯著延長(zhǎng)，存活率顯著增加。
　　 3、LT-Y008對(duì)骨髓損傷的保護(hù)作用初步機(jī)制研究:(1) d5和d10時(shí)，模型組比正常組大鼠血漿MnSOD顯著降低，陽性組和LT-Y008各劑量組比模型組大鼠血漿MnSOD顯著升高，提示LT-Y008的骨髓保護(hù)作用可能與增加MnSOD水

12、平相關(guān);(2)d3時(shí)模型組比正常組小鼠血漿TNFα、IL-1β水平顯著升高，陽性組和LT-Y008低、中劑量組比模型組小鼠血漿TNFα、IL-1β水平顯著減低，d14時(shí)模型組比正常組小鼠血漿TNFα、IL-1β水平顯著降低，陽性組和LT-Y008各劑量組組比模型組小鼠血漿TNFα水平顯著升高，LT-Y008低劑量組比模型組小鼠血漿IL-1β水平顯著升高，提示LT-Y008骨髓保護(hù)作用可能與抵抗過度的炎癥反應(yīng)相關(guān)。
　　 結(jié)論:1