應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對支氣管哮喘患兒STAT1的表達(dá)水平的研究.pdf

1、[目的]
　　 1.比較廣東深圳哮喘患兒與非哮喘疾病患兒的外周血STAT1基因表達(dá)的差異;
　　 2.探討STAT1基因與廣東深圳地區(qū)哮喘患兒的相關(guān)性，進(jìn)一步研究小兒哮喘的病因和病理生理機(jī)制，為評估小兒哮喘風(fēng)險(xiǎn)度提供有力依據(jù)。
　　 [方法]
　　 本實(shí)驗(yàn)采用病例-對照研究方法。于采血當(dāng)日的同一時(shí)間抽取3ml血液，在2小時(shí)內(nèi)分離淋巴細(xì)胞，并保存于Trizol中，將30例哮喘患幾R(shí)NA歸為實(shí)驗(yàn)組，將22例非

2、哮喘疾病患兒RNA歸為對照組，冰凍運(yùn)輸至深圳市欣海凌生物科技有限公司。通過實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(real time polymerase chain reaction，RT-PCR)進(jìn)行STAT1基因的分析:總RNA提取和純化，電泳鑒定，反轉(zhuǎn)錄，擴(kuò)增效率一致性檢測，RT-PCR擴(kuò)增。運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)曲線、融解曲線、擴(kuò)增曲線對STAT1基因進(jìn)行分析，利用公式RQ=2-△△CT對兩組患兒該基因進(jìn)行相對定量分析。同時(shí)，對兩組實(shí)驗(yàn)對象年齡進(jìn)行差異性分析

3、。
　　 [結(jié)果]
　　 1.哮喘組與對照組之間的年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差距，具有可比性。
　　 2.擴(kuò)增效率一致性分析說明STAT1和管家基因β-actin的擴(kuò)增效率一致，可以利用公式2-△△CT×100％進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果分析。
　　 3.哮喘組STAT1 mRNA表達(dá)水平明顯高于對照組(3.01±2.66，0.76±0.68)，兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 ST