缺鉀對家兔心肌組織鉀離子及NK+-ATPase的影響.pdf

1、目的：應(yīng)用低鉀飼喂家兔制備缺鉀動物模型，測定在此過程中家兔血漿鉀離子濃度，心肌組織鉀離子含量及Na+-K+-ATPase的活性和 Na+-K+-ATPaseα1、α2亞基的蛋白表達(dá)，再進(jìn)行補(bǔ)鉀實(shí)驗(yàn)，探究家兔缺鉀過程中血漿、心肌組織鉀離子的變化規(guī)律，心肌組織Na+-K+-ATPase活性和α1、α2亞基蛋白表達(dá)對缺鉀的反應(yīng)，并探討Na+-K+-ATPase對家兔缺鉀及補(bǔ)鉀過程中鉀離子分布的影響。
　　 方法：
　　 1.實(shí)

2、驗(yàn)動物分組，模型制備及處理清潔級健康家兔64只，雄性，兔齡12～14周，體重2.0～2.7kg（河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供），隨機(jī)分為8組，每組8只，其中6組按低鉀飼喂的時間分為正常對照組（T0組）、低鉀3天組（T1組）、低鉀6天組（T2組）、低鉀9天組（T3組）、低鉀12天組（T4組）、低鉀15天組（T5組），另外2組分別為補(bǔ)鉀對照組（RC組）和補(bǔ)鉀實(shí)驗(yàn)組（RE組）。家兔購入后正常飼喂一周開始低鉀飼喂進(jìn)行模型制備。T0組和RC組僅給

3、予正常飲食（每只家兔喂食正常飼料100g/d，自由飲普通水），T1組給予低鉀飲食（每只家兔喂食低鉀飼料100g/d，自由飲蒸餾水）3天，T2組給予低鉀飲食6天，T3組給予低鉀飲食9天，T4組給予低鉀飲食12天，T5組和RE組給予低鉀飲食15天。T0、T1、T2、T3、T4、T5組家兔分別于設(shè)定飼喂時間結(jié)束后經(jīng)耳中央動脈取血后開胸取心臟。RE組缺鉀模型制備完成后靜脈泵入氯化鉀(KCl)行補(bǔ)鉀實(shí)驗(yàn)，RC組作為其對照組同時給予補(bǔ)鉀，兩組家兔麻

4、醉成功后，固定，于右股靜脈穿刺置套管針建立液路，持續(xù)泵入KC1，于左耳中央動脈留置套管針，肝素封管，妥善固定以便取血，監(jiān)測靜脈泵入KC1過程中血漿鉀離子濃度變化。待兩組家兔血漿鉀離子濃度均達(dá)到5.5mmol/L并穩(wěn)定至少1h，停止泵鉀，立即開胸取心臟以測定心肌鉀離子含量。
　　 2.標(biāo)本的采集處理及檢測方法T0、T1、T2、T3、T4、T5組家兔模型制備完成當(dāng)天經(jīng)耳中央動脈取血1ml，以測定血漿鉀離子、鈉離子及血紅蛋白濃度，然后

5、開胸取心臟。
　　 T0、T1、T2、T3、T4、T5組家兔，分別于觀察結(jié)束當(dāng)天經(jīng)耳緣靜脈注射4％戊巴比妥1ml/kg，麻醉成功后迅速固定，剪去家兔胸毛，以75％的乙醇消毒胸部，用大剪刀剪開其胸部皮膚，逐層剪開肌肉、胸骨，掀開胸骨，充分暴露家兔心臟，分離心臟與周圍組織，摘取心臟。RC組及RE組補(bǔ)鉀實(shí)驗(yàn)結(jié)束后同法取心臟。
　　 T0、T1、T2、 T3、T4、T5組及RC組、RE組家兔取左心室前壁組織約35mg，用預(yù)冷等滲

6、氯化鋰沖洗，取濾紙反復(fù)吸干，準(zhǔn)確稱重，-20℃保存以測定心肌鉀離子和鈉離子含量。
　　 T0、T3、T5組家兔取左心室前壁組織2塊，每塊重約0.5g，迅速用預(yù)冷生理鹽水沖洗，放入凍融管標(biāo)記，置于液氮罐中冷凍保存。取材結(jié)束-70℃冰箱保存，分別留作測定心肌Na+-K+-ATPase活性和Na+-K+-ATPaseα1、α2亞基蛋白表達(dá)。T1、T2、T4組家兔取左心室前壁組織1塊，重約0.5g，用以測定心肌Na+-K+-ATPase

7、活性，標(biāo)本處理方法同T0、T3、T5組。
　　 血漿鉀、鈉離子濃度采用離子選擇性電極測量法測定，血紅蛋白濃度采用分光光度法測定。
　　 心肌鉀、鈉離子含量采用火焰原子吸收光度法測定。
　　 心肌Na+-K+-ATPase活性按照考馬斯亮藍(lán)蛋白測定試劑盒檢測總蛋白含量后用超微量ATP酶測試盒檢測Na+-K+-ATPase活性。
　　 心肌Na+-K+-ATPaseα1和α2亞基蛋白表達(dá)通過Western B

8、lot法測定。
　　 RC組心肌鉀離子攝取量以RC組每只家兔心肌鉀離子含量與T0組心肌鉀離子含量的均數(shù)之差表示；RE組心肌鉀離子攝取量以RE組每只家兔心肌鉀離子含量與T5組心肌鉀離子含量的均數(shù)之差表示。每只家兔心肌鉀離子攝取量除以泵注KC1時間計算得到相應(yīng)平均心肌鉀離子攝取率。
　　 所有數(shù)據(jù)采用spss17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（（？）±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用

9、單因素方差分析，如不滿足條件，則采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義，相關(guān)分析采用直線相關(guān)性及回歸分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.低鉀飼喂期間動物未見明顯不適，對低鉀飼料耐受良好。
　　 2.各組家兔體重及兔齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05。
　　 3.血漿鉀、鈉離子濃度和血紅蛋白濃度的變化T1、T2、T3、T4、T5組血漿鉀離子濃度較正常對照組（T0組）逐漸降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.

10、05）；T1、T2、T3、T4、T5組血漿鈉離子濃度和血紅蛋白濃度與正常對照組（T0組）相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 4.T1組心肌鉀離子含量較正常對照組（T0組）無明顯降低（P＞0.05）， T2、T3、T4、T5組心肌鉀離子含量較正常對照組（T0組）降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；T1、T2、T3、T4、T5組心肌鈉離子含量與正常對照組（T0組）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　

11、5.心肌Na+-K+-ATPase活性的變化T1、T2組心肌Na+-K+-ATPase活性較正常對照組（T0組）無明顯升高（P＞0.05），T3、T4、T5組心肌Na+-K+-ATPase活性較正常對照組（T0組）升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6.心肌鉀離子含量與心肌組織Na+-K+-ATPase活性的相關(guān)性對心肌鉀離子含量與心肌組織Na+-K+-ATPase活性進(jìn)行相關(guān)性分析，二者表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)，回歸線性方程為

12、Y=20.16-0.11X，決定系數(shù)R2=0.894， P＜0.05。
　　 7.心肌組織Na+-K+-ATPaseα1和α2亞基的蛋白表達(dá)T3、T5組心肌Na+-K+-ATPaseα1亞基蛋白表達(dá)水平較正常對照組(T0組)升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；T3、T5組心肌Na+-K+-ATPaseα2亞基蛋白表達(dá)水平較正常對照組（T0組）降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 8.補(bǔ)鉀后心肌鉀離子攝取量和

13、平均心肌鉀離子攝取率的比較R組心肌鉀離子攝取量較RC組心肌鉀離子攝取量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；RE組平均心肌鉀離子攝取率較RC組平均心肌鉀離子攝取率升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；補(bǔ)鉀結(jié)束時，RE組輸注KC1的總劑量較RC組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.本實(shí)驗(yàn)采用低鉀飼喂可使家兔血漿鉀離子降低，成功制備家兔缺鉀模型。
　　 2.缺鉀可造成心肌組織鉀離子含量