家兔低血鉀模型中骨骼肌鉀離子的變化及其機(jī)制的探討.pdf

1、目的：應(yīng)用低鉀飼料致家兔低血鉀模型，測(cè)定家兔血漿鉀離子濃度，以觀(guān)察低鉀程度，同時(shí)觀(guān)察骨骼肌組織鉀離子，鈉離子，鎂離子含量，細(xì)胞膜上Na，K-ATP酶活性及α1α2亞型的表達(dá)情況，探究缺鉀時(shí)家兔血漿鉀，骨骼肌組織內(nèi)鉀離子含量的變化規(guī)律，并初步探討其變化的機(jī)制。
　　 方法：清潔級(jí)健康家兔48只，體重2.0～2.7kg、兔齡12～14周，雄性（河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），隨機(jī)分為6組，每組8只，按低鉀飼喂的時(shí)間分為正常對(duì)照組(A

2、組)、低鉀飲食3天組（B組）、低鉀飲食6天組(C組)、低鉀飲食9天組（D組）、低鉀飲食12天組(E組)、低鉀飲食15天組（F組）。家兔購(gòu)入后先放置于安靜、舒適的環(huán)境中，正常飼喂一周后開(kāi)始用家兔低鉀飼料飼喂，低鉀飲食期間自由攝取蒸餾水。以低鉀飲食開(kāi)始前當(dāng)天作為第0天，低鉀飲食后第1天作為第1天，依次類(lèi)推。分別以低鉀飼喂第0天，第3天，第6天，第9天，第12天，第15天作為終點(diǎn)處死動(dòng)物并留取相應(yīng)標(biāo)本。
　　 標(biāo)本處理當(dāng)天先取出家兔稱(chēng)

3、重，記錄體重變化情況，后置于安靜環(huán)境下2小時(shí)。4％戊巴比妥于耳緣靜脈注射1ml/kg，麻醉后，迅速剪去家兔右下肢兔毛，以75％的乙醇溶液消毒右下肢，用大剪刀剪開(kāi)其右下肢皮膚，分離筋膜，分別暴露分離比目魚(yú)肌和股靜脈。先由股靜脈留取血液樣本2ml,應(yīng)用離子選擇電極法測(cè)定血漿鉀離子濃度，后取比目魚(yú)肌約2g，去除肌肉上的筋膜組織，準(zhǔn)確稱(chēng)重，用預(yù)冷生理鹽水沖洗比目魚(yú)肌組織，取濾紙反復(fù)吸干，放入標(biāo)記好的凍融管，迅速置于液氮罐中冷凍保存。用以測(cè)定Na

4、，K-ATP酶活性，取材結(jié)束-70℃冰箱保存。比目魚(yú)肌Na，K-ATP酶活性按照考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒，檢測(cè)總蛋白含量后用超微量ATP酶測(cè)試盒檢測(cè)Na，K-ATP酶活性。取比目魚(yú)肌約35mg，去除肌肉上的筋膜組織，用預(yù)冷等滲氯化鋰沖洗，取濾紙反復(fù)吸干，準(zhǔn)確稱(chēng)重，-20℃保存。采用火焰原子吸收光度計(jì)測(cè)定骨骼肌組織內(nèi)鉀離子，鈉離子，鎂離子含量。取比目魚(yú)肌約500-600mg，去除肌肉上的筋膜組織，用預(yù)冷生理鹽水沖洗比目魚(yú)肌組織，取濾紙反復(fù)

5、吸干，放入凍融管，標(biāo)上標(biāo)簽，迅速置于液氮罐中冷凍保存，取材結(jié)束-70℃冰箱保存。采用Western blot測(cè)定A組D組F組比目魚(yú)肌Na，K-ATP酶α1，α2亞型表達(dá)。
　　 所有數(shù)據(jù)通過(guò)spss13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(X)±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.家兔低鉀飲食前后體重比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.低鉀飲食3天后即可觀(guān)察到血漿鉀離子下

6、降（P＜0.05），血漿鉀離子隨低鉀飲食天數(shù)增加而逐漸下降。
　　 3.低鉀飲食3天后，觀(guān)察比目魚(yú)肌組織內(nèi)鉀離子含量與A組相比開(kāi)始降低(P＜0.05)，且隨著低鉀飲食天數(shù)增加，比目魚(yú)肌組織內(nèi)鉀離子含量逐漸降低。
　　 4.低鉀飲食3天后，觀(guān)察比目魚(yú)肌組織內(nèi)鈉離子含量與A組相比增加（P＜0.05），且隨著低鉀飲食天數(shù)增加，比目魚(yú)肌組織內(nèi)鈉離子含量逐漸增高。F組比目魚(yú)肌組織內(nèi)鎂離子含量相對(duì)A組降低(P＜0.05)。
　

7、　 5.低鉀飲食3天后，可觀(guān)察到比目魚(yú)肌Na，K-ATP酶活性下降(P＜0.05)，且隨著低鉀飲食天數(shù)增加，比目魚(yú)肌Na，K-ATP酶活性降低。
　　 6.D組比目魚(yú)肌Na，K-ATP酶α1亞型表達(dá)較A組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，F(xiàn)組相對(duì)A組降低(P＜0.05)，D組α2亞型表達(dá)相對(duì)A組降低(P＜0.05)，F(xiàn)組相對(duì)A組顯著降低。
　　 結(jié)論：低鉀飲食可造成比目魚(yú)肌組織內(nèi)鉀離子含量降低，比目魚(yú)肌組織內(nèi)鈉離子顯著增高，鎂離子含量降低