利用力學(xué)因素和干細(xì)胞的組織工程小口徑血管研究.pdf

1、隨著血管性疾病發(fā)病率的持續(xù)升高，對(duì)血管移植材料的需求也不斷膨脹，由于人工合成材料和自體血管移植存在諸多問(wèn)題，研究者嘗試通過(guò)組織工程的方法來(lái)構(gòu)建血管。干細(xì)胞憑借強(qiáng)大的生長(zhǎng)、增殖和分化潛能為其在組織工程中的應(yīng)用開辟了廣闊的前景；力學(xué)因素和生長(zhǎng)因子在組織工程研究中的重要作用也得到了越來(lái)越多的認(rèn)可。
　　 本文使用骨髓間充質(zhì)細(xì)胞和外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞作為主要的研究對(duì)象，觀察其在力學(xué)因素和生長(zhǎng)因子刺激下的增殖分化，并進(jìn)行流動(dòng)培養(yǎng)環(huán)境下的組織工

2、程血管體外構(gòu)建，探索血管組織工程的可行性途徑。其中主要用到的實(shí)驗(yàn)方法包括使用Ficoll法分離兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞，酶消化法分離兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，組織貼塊法分離大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，免疫鑒定后作為種子細(xì)胞。并使用磷酸鈣方法轉(zhuǎn)染293T包裝細(xì)胞，制備逆轉(zhuǎn)錄病毒，VEGF基因修飾兔骨髓干細(xì)胞。在培養(yǎng)細(xì)胞的同時(shí)我們通過(guò)MTT和SEM等方法檢測(cè)細(xì)胞黏附、增殖等生物細(xì)胞相容性指標(biāo)和拉伸實(shí)驗(yàn)測(cè)定力學(xué)性能評(píng)價(jià)卵磷脂改性PCL電紡絲材料

3、。在確定了理想材料的同時(shí)，力學(xué)裝置的調(diào)試調(diào)試工作也基本完成。我們使用平行平板流動(dòng)裝置對(duì)干細(xì)胞給予一定剪切力和生長(zhǎng)因子刺激，通過(guò)免疫組化檢測(cè)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化情況。并在模擬生物體正常血流情況的環(huán)境下，分別種植相應(yīng)的種子細(xì)胞初步構(gòu)建具有一定功能的人工血管，使用HE等方法進(jìn)行形態(tài)功能檢測(cè)。
　　 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中成功獲取了原代骨髓間充質(zhì)細(xì)胞、外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞、成熟內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞并建立方法，相應(yīng)抗體的免疫染色鑒定陽(yáng)性率達(dá)60

4、％以上；構(gòu)建了實(shí)驗(yàn)室首個(gè)適用于小口徑人工血管的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，可在一定程度上模擬人體血管內(nèi)壓力，脈搏和血液平流環(huán)境；通過(guò)測(cè)試我們認(rèn)為卵磷脂改性的PCL高分子聚合物電紡絲支架的生物相容性良好，是一種可理想的組織工程血管支架材料；在力學(xué)因素和內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的作用下，外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞有明顯的定向分化為成熟內(nèi)皮的能力，而骨銹間充質(zhì)細(xì)胞分化不明顯；使用生物反應(yīng)器系統(tǒng)，初步構(gòu)建了以平滑肌細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)細(xì)胞為種子細(xì)胞的小口徑人工血管，培養(yǎng)3天后細(xì)胞生長(zhǎng)