苦參主要成分體外抗H3N2亞型豬流感病毒作用及其機制研究.pdf

1、豬流感（Swine Influenza, SI）是由豬流感病毒（Swine Influenza Virus，SIV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性呼吸道傳染病，是規(guī)?；B(yǎng)豬場的常發(fā)病之一，以高致病率、低死亡率為特征。本病極易與其他呼吸道病原混合感染，使其死亡率急劇升高，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。豬是豬流感、人流感及禽流感等多種流感病毒共同的易感宿主，流感病毒易在其體內重組而產生新的流感病毒株。同時，豬流感病毒不僅能感染豬，也能感染其

2、他動物。因此，對豬流感病毒的研究不但有重要的獸醫(yī)傳染病學意義，更有深遠的公共衛(wèi)生意義。流感病毒因血清型多、易變異以及易產生耐藥性等，疫苗接種及抗流感西藥的療效甚微，因此當前尚無豬流感特效藥。所以，研究及開發(fā)抗豬流感病毒天然藥物及其有效成分迫在眉睫。
　　目的:本研究旨在細胞水平上探討苦參主要成分的抗H3N2亞型豬流感病毒效果，并對其作用機制進行初步探索。研究結果將為抗流感機制的深入研究提供基礎，為獸醫(yī)臨床及醫(yī)學臨床用藥提供科學依據(jù)

3、和參考，更為抗流感病毒天然藥物的開發(fā)及研制奠定基礎。
　　方法:采用傳統(tǒng)有機溶劑回流提取法、傳統(tǒng)水提醇沉法分別制備苦參生物堿、黃酮、皂苷和粗多糖成分，以利巴韋林作為陽性對照藥，選擇犬腎上皮細胞株(MDCK細胞)作為H3N2豬流感病毒作用的細胞體系，通過細胞病變(CPE)觀察法和噻唑藍鹽微量酶反應比色法（MTT法）定性、定量測定細胞狀態(tài)，從而對苦參生物堿、黃酮、皂苷、粗多糖成分抗H3N2豬流感病毒作用加以比較，然后通過改變給藥方式等

4、條件對其作用機制進行初步探索。
　　結果顯示:高濃度的苦參生物堿、黃酮、皂苷、粗多糖均會影響MDCK細胞的生長狀態(tài)，其最大安全濃度分布在6.9μg/ml～1.5138 mg/ml之間，其中皂苷成分的毒性作用最小，濃度為1.5138 mg/ml時仍不表現(xiàn)細胞毒性作用。對四種成分體外抗SIV作用的研究發(fā)現(xiàn)，四種成分都能顯著性抑制H3N2豬流感病毒，其中生物堿和粗多糖成分的效果優(yōu)于利巴韋林。此外，(1)四種成分均能明顯抵抗SIV的吸附，

5、皂苷效果優(yōu)于利巴韋林;(2)四種成分均能干擾病毒復制，生物堿的作用優(yōu)于利巴韋林;(3)四種成分與病毒同時接觸細胞時，均有顯著抑制SIV作用，皂苷的效果優(yōu)于利巴韋林;(4)四種成分均有體外直接殺滅病毒作用，生物堿的作用優(yōu)于利巴韋林?？鄥⑺姆N成分的最小有效劑量分布在0.1078μg/ml～19.2μg/ml之間，其中苦參黃酮的最小有效濃度最低;治療指數(shù)在32～128之間，皂苷成分的治療指數(shù)最高?？鄥⒊煞峙c病毒同時接觸細胞時，各成分均呈現(xiàn)出明