CaN-NFATs-ET1通路在肺癌細(xì)胞A549增殖中的作用.pdf

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：406522511361南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文CaNNFATsET1通路在肺癌細(xì)胞通路在肺癌細(xì)胞A549A549增殖中的作用增殖中的作用EffectsofCaNNFATsET1PathwayonProliferationofLungCancerCellA549廖文杰培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系指導(dǎo)教師姓名、職稱：李蓉教授申請學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)申請學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：藥理學(xué)論文答

2、辯日期：2014年6月答辯委員會主席：任軍評閱人：盲審2014年6月10日摘要摘要目的目的：前期研究發(fā)現(xiàn)具有中度成瘤性的人胚腎細(xì)胞(HumanEmbryonicKidney293cellHEK293細(xì)胞)在靜息狀態(tài)下就存在NFATs的活化，且外源導(dǎo)入CHP2基因可通過促進(jìn)HEK293細(xì)胞中活化T細(xì)胞核因子（nuclearfactofactivatedTcellsNFATs）的活化及內(nèi)皮素1（endothelin1ET1）的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤

3、細(xì)胞的生長。本研究旨在分析不同癌細(xì)胞株中NFATs及ET1的表達(dá)差異，闡明與肺癌細(xì)胞A549增殖和遷移相關(guān)的NFATs亞型的種類及其組成性活化狀態(tài)，并探討NFATs組成型活化促肺癌細(xì)胞增殖和遷移的機(jī)制。這方面的研究將有助于深化我們對CaNNFATc1ET1通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用的認(rèn)識，為抗腫瘤藥物的研究提供新的作用靶點。方法方法：1.通過生物信息學(xué)技術(shù)，分析不同癌細(xì)胞株中NFATs及ET1的表達(dá)差異。2.通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（re

4、versetranscriotionpolymerasechainreactionRTPCR）和蛋白印跡(Westernblot)技術(shù)檢測多種非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞（H23、H1299和A549）和正常人支氣管上皮細(xì)胞（HBE）中NFATs及ET1的mRNA和蛋白表達(dá)水平，同時應(yīng)用核漿分離和免疫熒光技術(shù)確定肺癌細(xì)胞A549及HBE細(xì)胞中NFATs的核、漿分布情況；3.采用細(xì)胞計數(shù)和細(xì)胞增殖—毒性檢測方法來比較肺癌細(xì)胞A549及HBE細(xì)胞的增殖

5、差別；4.分別借助劃痕實驗和軟瓊脂實驗觀察細(xì)胞的遷移和集落形成情況，以判斷肺癌細(xì)胞A549及HBE細(xì)胞的侵襲能力；5.應(yīng)用單細(xì)胞克隆實驗，驗證肺癌細(xì)胞A549和HBE細(xì)胞的成瘤能力；6.使用CaNNFATs通路阻斷劑CsA阻斷鈣調(diào)磷酸酶（CaN）的活性，觀察其對肺癌細(xì)胞A549及HBE細(xì)胞的影響（包括NFATs和ET1的表達(dá)水平以及細(xì)胞增殖情況）。結(jié)果結(jié)果：1.NFATc1NFATc4和ET1在不同癌細(xì)胞株中有表達(dá)，但不同癌細(xì)胞株中表達(dá)