人工皮膚用創(chuàng)傷敷料的研究.pdf

1、近年來，人們致力于研究各種各樣的皮膚替代物，為皮膚全層缺損的修復(fù)尤其是大面積深度燒傷病人的治療帶來了希望。由于單純表皮細(xì)胞膜片移植存在移植物菲薄易碎，操作困難，耗時長，從取材到臨床應(yīng)用需要3-4周時間，因缺乏真皮組織，創(chuàng)面愈合后疤痕增生嚴(yán)重，抗感染功能差，彈性欠佳，柔軟度不足，不耐磨等缺點(diǎn)，因此一種理想的皮膚替代物必需要有真皮結(jié)構(gòu)的參與。本課題中，我們采用了一種新的交聯(lián)劑——原花青素(PA)，以期提高膠原蛋白海綿的各方面性能。

2、本文首先研究了PA交聯(lián)膠原海綿膜的交聯(lián)工藝。包括原花青素的濃度，溶液的pH值，交聯(lián)介質(zhì)和原花青素的聚合程度等對交聯(lián)效果的影響。我們分別配置了0％，0.1％，0.2％，0.5％，1.0％和2.0％PA的PBS(pH7.4)交聯(lián)溶液，體外酶降解證實(shí)0.5％的PA的PBS(pH7.4)交聯(lián)溶液的交聯(lián)效果最好；分別配置了0.05mol/L 的2-甲基嗎啡磺酸(MES)100ml(pH5.0)、PBS緩沖溶液100ml(pH7.4)和0.1mol

3、/L的Na<,2>HPO<,4>的溶液100ml(pH9.0)不同pH值的交聯(lián)溶液，體外酶降解證實(shí)在PBS(pH7.4)緩沖溶液100ml(pH7.4)有最好的交聯(lián)效果：我們配置了含40％的乙醇的PBS溶液(pH7.4)，和PBS水溶液(pH7.4)各100ml，作為交聯(lián)溶液，體外酶降解證實(shí)在含40％的乙醇的PBS溶液(pH7.4)有最好的交聯(lián)效果；使用低聚PA和多聚PA作為交聯(lián)劑，體外酶降解實(shí)驗(yàn)證明低聚PA有更好的交聯(lián)效果。

4、結(jié)果表明，含有濃度為0.5％低聚PA，含40％酒精PBS(pH7.4)溶液有最好的交聯(lián)效果。 通過PA與戊二醛(GA)對比實(shí)驗(yàn)，研究了PA交聯(lián)的膠原蛋白海綿的性能。分別配置PA濃度為0.5％的含40％的乙醇的PBS溶液(pH7.4)100ml，濃度為0.625％戊二醛PBS溶液(pH7.4)作為交聯(lián)劑，將膠原蛋白海綿分別浸入，在室溫下，交聯(lián)48個小時。體外酶降解實(shí)驗(yàn)證明，PA交聯(lián)的膠原蛋白海綿和GA交聯(lián)的膠原蛋白海綿抗降解效果沒

5、有顯著差別，說明PA和GA交聯(lián)效果相當(dāng)。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明：GA的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于PA，PA有促進(jìn)細(xì)胞生長的作用。溶血性實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)過超聲清洗和浸泡PA和GA交聯(lián)的膠原海綿膜都達(dá)到溶血百分?jǐn)?shù)低于5％的國家標(biāo)準(zhǔn)。在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，我們作了膠原海綿膜的動物皮下埋植實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步證明了PA作為交聯(lián)劑，較GA提高了膠原蛋白海綿的生物性能。本實(shí)驗(yàn)中，我們以未交聯(lián)的膠原蛋白海綿，戊二醛(GA)交聯(lián)的膠原蛋白海綿，原花青素(PA)交聯(lián)的膠原蛋白海綿作為

6、材料，以家兔作為實(shí)驗(yàn)動物，分別將三種膠原蛋白海綿在兔背部埋植。手術(shù)后分別于1周、2周、4周進(jìn)行組織學(xué)觀察，制備組織學(xué)標(biāo)本。 結(jié)果： (1)未經(jīng)交聯(lián)處理的膠原蛋白海綿，術(shù)后1周，開始降解，可見較多淋巴細(xì)胞浸潤于多孔區(qū)域，發(fā)生了明顯的炎癥反應(yīng)。術(shù)后2周，未經(jīng)交聯(lián)的膠原蛋白海綿的網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)不明顯，與周圍組織分界不清，呈現(xiàn)分散的紅染不規(guī)則形狀，炎癥反應(yīng)消退。術(shù)后4周，對照組未經(jīng)交聯(lián)的膠原蛋白海綿已經(jīng)完全找不到了，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)完全消失，

7、成為均勻的真皮組織，他們已經(jīng)被完全降解。 (2)GA交聯(lián)的膠原蛋白海綿，膠原蛋白海綿經(jīng)過徹底的清洗。術(shù)后1周，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)明顯，表現(xiàn)出了輕微的炎癥反應(yīng)。術(shù)后2周，膠原海綿膜也有少量成纖維細(xì)胞侵入增長，炎癥消失。術(shù)后4周，膠原海綿膜結(jié)構(gòu)依然完整，但由于營養(yǎng)不良發(fā)生鈣化。成纖維細(xì)胞數(shù)量有所減少，血管數(shù)量也較以前有所減少。 (3)PA交聯(lián)的膠原蛋白海綿，術(shù)后1周，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)明顯，表現(xiàn)出細(xì)胞侵入生長。術(shù)后2周，膠原蛋白海綿與組織兼容性

8、更好，有新的成纖維細(xì)胞侵入增長。術(shù)后4周，膠原蛋白海綿開始出現(xiàn)降解，沒有發(fā)生鈣化，有大量成纖維細(xì)胞侵入生長，新生血管多。 本文的研究證實(shí)了，原花青素作為交聯(lián)劑，能夠使膠原蛋白海綿促進(jìn)細(xì)胞生長活動。體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)PA改性的膠原沒有細(xì)胞毒性，并且能夠抑止膠原酶的降解作用。PA能夠提高膠原蛋白海綿的交聯(lián)度，交聯(lián)度可以通過改變PA的濃度和反應(yīng)條件——pH、溫度、PA的形態(tài)(單體，寡聚體和多聚體)來控制。考慮到這些因素，材料的降解速率