雄性半滑舌鰨GH-IGF-I軸相關(guān)基因SNP和DNA甲基化與生長的相關(guān)性研究.pdf

1、本文以人工養(yǎng)殖的雄性半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)個(gè)體為實(shí)驗(yàn)對象,首次分析了GHR基因突變位點(diǎn)及其甲基化狀態(tài)對激素、生長性狀及基因表達(dá)的影響機(jī)理;并對GH基因的編碼區(qū)及其啟動(dòng)子區(qū)域的多態(tài)性與生長性狀相關(guān)性進(jìn)行了研究和分析。
　　1.雄性半滑舌鰨GHR基因多態(tài)性及與生長性狀相關(guān)性分析
　　GHR是一種細(xì)胞表面受體,對 GH功能的發(fā)揮具有必不可少的作用。本文的目的是檢測GHR基因的多態(tài)性并分析其與激素水

2、平和生長性狀的相關(guān)性。結(jié)果顯示:在GHR基因檢測到兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性:SNP1[c.G1357A(p.Val376Ile)]位于外顯子8,稱為L1位點(diǎn);SNP2(c.G1479A)位于外顯子9,稱為L2位點(diǎn)。單因素方差分析顯示只有 L1與性腺重(P≤0.05)、體重(P<0.01)和激素水平(P≤0.05)呈相關(guān)性。通過多重比較顯示,AA和AG基因型個(gè)體的體重和T3水平顯著高于GG基因型個(gè)體;AA和AG基因型個(gè)體的性腺重顯著低于GG基因

3、型個(gè)體。這表明GHR基因編碼區(qū)突變進(jìn)可能影響雄性半滑舌鰨的生長狀態(tài),并且L1位點(diǎn)可以作為半滑舌鰨的一個(gè)遺傳標(biāo)記。
　　2.雄性半滑舌鰨肝臟GHR基因甲基化水平及基因表達(dá)水平分析
　　表觀遺傳修飾特別是DNA甲基化,對基因的表達(dá)具有重要的調(diào)控作用。本實(shí)驗(yàn)研究了GHR基因外顯子8區(qū)域的甲基化狀態(tài)并探索了其對基因表達(dá)的影響。經(jīng)亞硫酸修飾,由于L1位點(diǎn)突變,使GG基因型較AA和AG基因型多一個(gè)CpG位點(diǎn),且此甲基化位點(diǎn)高度甲基化,其

4、他兩個(gè)CpG位點(diǎn)在三種基因型中沒有差別。經(jīng)實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測三種基因型的GHR基因的相對表達(dá)量。通過多重比較,AA基因型和AG基因型個(gè)體的基因表達(dá)水平極顯著高于GG基因型個(gè)體?；诒狙芯?提出GHR基因外顯子8區(qū)域CpG位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)可能影響GHR基因的轉(zhuǎn)錄水平,結(jié)果為半滑舌鰨生長生理機(jī)理提供表觀遺傳學(xué)的理論支持。
　　3.雄性半滑舌鰨GH基因的編碼區(qū)及其啟動(dòng)子多態(tài)性及與生長性狀相關(guān)性分析
　　實(shí)驗(yàn)分析了GH基因編碼區(qū)

5、及其啟動(dòng)子區(qū)域的多態(tài)性,同時(shí)對各基因型與其體重、體長和激素水平等進(jìn)行了關(guān)聯(lián)性分析。結(jié)果顯示GH基因編碼區(qū)有兩個(gè)SNP:SNP1[c.C382T(p.Phe106Leu)],位于外顯子4,命名為L3位點(diǎn);SNP2[c.C235T(p.Arg57Cys)],位于外顯子3,命名為L4位點(diǎn)。按照數(shù)理統(tǒng)計(jì)的要求,經(jīng)過單因素方差分析,L3位點(diǎn)與體重(P≤0.05)、去內(nèi)臟重(P≤0.05)和T3水平(P<0.01)呈顯著相關(guān)。多重比較的結(jié)果顯示,C

6、C基因型個(gè)體的體重、去內(nèi)臟重和T3水平顯著高于TT基因型個(gè)體。通過蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析,發(fā)現(xiàn)L3位點(diǎn)的突變使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變。這些結(jié)果表明半滑舌鰨GH基因的突變可以影響其激素水平和生長性狀,L3位點(diǎn)可以用作分子標(biāo)記,從遺傳學(xué)的角度闡釋 GH基因?qū)ιL生理的調(diào)控機(jī)制。盡管在啟動(dòng)子區(qū)域沒有發(fā)現(xiàn)突變,但預(yù)測出其啟動(dòng)子包含了許多CpG位點(diǎn),這可能為尋找半滑舌鰨的表觀遺傳標(biāo)記奠定基礎(chǔ)。
　　綜上所述,本研究對半滑舌鰨GHR基因編碼區(qū)多態(tài)性及甲