瘦素對(duì)人前脂肪細(xì)胞增殖及分化的影響.pdf

1、目的：觀察瘦素在體外對(duì)人前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響，探討瘦素在肥胖發(fā)生中的可能作用機(jī)制。 方法：(1)采用膠原酶消化法從人腹部皮下脂肪中分離出前脂肪細(xì)胞，并觀察體外培養(yǎng)的人前脂肪細(xì)胞增殖和分化過(guò)程。通過(guò)觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化、生長(zhǎng)曲線以及油紅O對(duì)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)染色對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。(2)分別用低、中、高三種不同濃度的瘦素(10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)對(duì)培養(yǎng)的人前脂肪細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，培養(yǎng)24h、48h、72h時(shí)用M

2、TT法和細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。(3)分別用低、中、高三種不同濃度的瘦素(10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)對(duì)分化培養(yǎng)中的前脂肪細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，在分化的第4d、8d、16d用油紅O染色提取法檢測(cè)瘦素對(duì)前脂肪細(xì)胞分化的影響；在分化的第8d用RT—PCR檢測(cè)前脂肪細(xì)胞分化轉(zhuǎn)錄因子PPARγ2和C/EBPα的mRNA水平。(4)對(duì)各組參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以觀察瘦素對(duì)人前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響。 結(jié)果：(1)成功分

3、離并培養(yǎng)人前脂肪細(xì)胞，觀察了它的增殖和分化過(guò)程。細(xì)胞形態(tài)與成纖維細(xì)胞相似，增殖期的4—10d為對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期；分化培養(yǎng)基培養(yǎng)的第4d可見(jiàn)脂質(zhì)小滴，脂滴逐漸增多，21d左右大部分分化為成熟脂肪細(xì)胞。(2)MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示高濃度瘦素能夠促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖，在24h、48h、72h時(shí)細(xì)胞增殖較對(duì)照組分別增加了7％、12.8％和5.7％。低濃度和中濃度瘦素對(duì)前脂肪細(xì)胞的增殖沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用。通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)法也發(fā)現(xiàn)，高濃度瘦素干預(yù)48h能夠促進(jìn)

4、前脂肪細(xì)胞的增殖。(3)油紅O染色提取法結(jié)果表明高濃度瘦素干預(yù)4d、8d時(shí)能夠促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化，與對(duì)照組相比分別增加了13％和23.2％；而在16d時(shí)其促進(jìn)作用不顯著。低濃度和中濃度瘦素對(duì)前脂肪細(xì)胞的分化均沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用。RT—PCR結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，高濃度瘦素干預(yù)8d時(shí)前脂肪細(xì)胞分化轉(zhuǎn)錄因子PPARγ2和C/EBPα的mRNA表達(dá)較對(duì)照組增加。 結(jié)論：(1)成功地提取和培養(yǎng)了人腹部皮下前脂肪細(xì)胞，為研究各種激素和藥物等對(duì)前脂