瘦素對人前脂肪細胞增殖及分化的影響.pdf

1、目的：觀察瘦素在體外對人前脂肪細胞增殖和分化的影響，探討瘦素在肥胖發(fā)生中的可能作用機制。 方法：(1)采用膠原酶消化法從人腹部皮下脂肪中分離出前脂肪細胞，并觀察體外培養(yǎng)的人前脂肪細胞增殖和分化過程。通過觀察細胞的形態(tài)學變化、生長曲線以及油紅O對細胞內(nèi)脂質(zhì)染色對細胞進行鑒定。(2)分別用低、中、高三種不同濃度的瘦素(10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)對培養(yǎng)的人前脂肪細胞進行干預，培養(yǎng)24h、48h、72h時用M

2、TT法和細胞計數(shù)法檢測細胞增殖情況。(3)分別用低、中、高三種不同濃度的瘦素(10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)對分化培養(yǎng)中的前脂肪細胞進行干預，在分化的第4d、8d、16d用油紅O染色提取法檢測瘦素對前脂肪細胞分化的影響；在分化的第8d用RT—PCR檢測前脂肪細胞分化轉(zhuǎn)錄因子PPARγ2和C/EBPα的mRNA水平。(4)對各組參數(shù)進行統(tǒng)計學分析以觀察瘦素對人前脂肪細胞增殖和分化的影響。 結果：(1)成功分

3、離并培養(yǎng)人前脂肪細胞，觀察了它的增殖和分化過程。細胞形態(tài)與成纖維細胞相似，增殖期的4—10d為對數(shù)增長期；分化培養(yǎng)基培養(yǎng)的第4d可見脂質(zhì)小滴，脂滴逐漸增多，21d左右大部分分化為成熟脂肪細胞。(2)MTT法檢測結果顯示高濃度瘦素能夠促進前脂肪細胞的增殖，在24h、48h、72h時細胞增殖較對照組分別增加了7％、12.8％和5.7％。低濃度和中濃度瘦素對前脂肪細胞的增殖沒有明顯的促進作用。通過細胞計數(shù)法也發(fā)現(xiàn)，高濃度瘦素干預48h能夠促進

4、前脂肪細胞的增殖。(3)油紅O染色提取法結果表明高濃度瘦素干預4d、8d時能夠促進前脂肪細胞的分化，與對照組相比分別增加了13％和23.2％；而在16d時其促進作用不顯著。低濃度和中濃度瘦素對前脂肪細胞的分化均沒有明顯的促進作用。RT—PCR結果也發(fā)現(xiàn)，高濃度瘦素干預8d時前脂肪細胞分化轉(zhuǎn)錄因子PPARγ2和C/EBPα的mRNA表達較對照組增加。 結論：(1)成功地提取和培養(yǎng)了人腹部皮下前脂肪細胞，為研究各種激素和藥物等對前脂