雌激素對(duì)大鼠脂肪干細(xì)胞增殖及成平滑肌細(xì)胞分化影響的研究.pdf

1、目的:探討雌激素（17β-雌二醇）對(duì)大鼠脂肪干細(xì)胞（ASCs）的體外增殖以及成平滑肌細(xì)胞分化的影響。
　　方法:采用I型膠原酶消化法從雌性SD大鼠腹股溝區(qū)脂肪組織中分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞，傳至第3代細(xì)胞，利用流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表面抗原（CD90、CD73、CD45），進(jìn)行成脂、成骨誘導(dǎo)分化鑒定細(xì)胞多向分化能力。設(shè)置含不同濃度雌激素（10-7、10-8、10-9、10-10、10-11、0 mol/L）的DMEM培養(yǎng)基組，分別用于脂肪干

2、細(xì)胞的體外增殖，采用MTS法繪制各雌激素組的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，評(píng)價(jià)雌激素對(duì)脂肪干細(xì)胞體外增殖的影響及不同濃度組間的差異，以確定雌激素最適作用濃度。分化實(shí)驗(yàn)中，分別使用添加和不添加雌激素的成平滑肌誘導(dǎo)培養(yǎng)基（SMIM）誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞成平滑肌分化，在誘導(dǎo)分化2周后和4周后，采用免疫熒光、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time PCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）等方法檢測(cè)平滑肌特異性標(biāo)記物（α-SMA、SM22、Calpon

3、in、MHC）及雌激素受體（ERα）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與無(wú)激素組相比，各濃度雌激素均不同程度地促進(jìn)脂肪干細(xì)胞增殖，以10-9mol/L雌激素組最為明顯。分化實(shí)驗(yàn)結(jié)果：誘導(dǎo)2周后，雌激素組細(xì)胞的平滑肌分化早期標(biāo)志物（α-SMA）、分化中期標(biāo)志物（SM22，Calponin）、分化晚期標(biāo)志物（MHC）表達(dá)均高于無(wú)激素組（p＜0.05）；誘導(dǎo)4周后，兩組細(xì)胞的平滑肌分化早期標(biāo)志物、中期標(biāo)志物表達(dá)情況無(wú)差異，而晚期標(biāo)志